Η βασική διαφορά μεταξύ των φορέων εισαγωγής και αντικατάστασης είναι ότι ο φορέας εισαγωγής έχει την ικανότητα να εισάγει μέτρια μήκη ξένου DNA ενώ ο φορέας αντικατάστασης έχει την ικανότητα να φιλοξενεί μεγαλύτερα μήκη ξένου DNA.
Οι φορείς φάγων είναι οι βακτηριοφάγοι που χρησιμοποιούνται για την κλωνοποίηση. Υπάρχουν δύο τύποι φορέων φάγων. είναι διάνυσμα εισαγωγής και διάνυσμα αντικατάστασης. Επίσης, όλοι οι φορείς φάγων αποτελούνται από μη βασικά γονίδια. Ωστόσο, αυτά τα γονίδια πρέπει να αφαιρεθούν από τους φάγους για να διευκολυνθούν νέες εισαγωγές ξένου DNA.
Τι είναι ένα διάνυσμα εισαγωγής;
Καταρχάς, το διάνυσμα εισαγωγής είναι η απλούστερη μορφή φορέων κλωνοποίησης λάμδα. Στην πραγματικότητα, είναι ένας τύπος φορέα φάγου που έχει μια μοναδική θέση περιορισμού που εισάγεται στο γονιδίωμα του φορέα στη θέση του προαιρετικού DNA. Επιπλέον, το DNA του φάγου παραμένει χωρίς αφαίρεση. Αυτή η μη αφαίρεση του DNA του φάγου περιορίζει το μέγεθος των ενθέτων (ξένο DNA) που πρόκειται να κλωνοποιηθούν εντός του φορέα. Επιπλέον, αυτοί οι φορείς είναι χρήσιμοι στην κλωνοποίηση και έκφραση cDNA. Τα GT10, GT11 και Zap είναι παραδείγματα αυτού του φορέα.
Εικόνα 01: Φάγος Λάμδα
Το διάνυσμα εισαγωγής αποτελείται από μία τοποθεσία αναγνώρισης. Η κύρια λειτουργία αυτού του φορέα είναι να αναπτύξει βιβλιοθήκες cDNA που προέρχονται από ευκαρυωτικές αλληλουχίες mRNA. Επιπλέον, μπορεί να φιλοξενήσει μόνο μήκη ξένου DNA που κυμαίνονται μεταξύ 05-11 kb. Επίσης, διαθέτει μια μοναδική θέση διάσπασης για την εισαγωγή ξένου DNA.
Τι είναι οι φορείς αντικατάστασης;
Ο φορέας αντικατάστασης ή ο φορέας υποκατάστασης είναι ένας τύπος φορέα φάγου που αναπτύχθηκε από την αφαίρεση μιας μεσαίας περιοχής «θραύσματος πλήρωσης» του DNA φάγου. Το επιθυμητό ένθετο ξένου DNA αντικαθιστά το DNA του φάγου.
Εικόνα 02: Διάνυσμα αντικατάστασης
Οι φορείς αντικατάστασης είναι σημαντικοί για τη δημιουργία γονιδιωματικών βιβλιοθηκών όπως οι EMBL4 και Charon40. Αυτοί οι φορείς μπορούν να φιλοξενήσουν μεγαλύτερο μήκος ξένου DNA που κυμαίνεται μεταξύ 08-24kb μηκών. Η περιοχή πλήρωσης αποτελείται επίσης από ένα γονίδιο που καθιστά τον φορέα φάγου μη βιώσιμο εντός ενός βακτηριακού ξενιστή.
Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ των διανυσμάτων εισαγωγής και αντικατάστασης;
- Οι φορείς εισαγωγής και αντικατάστασης είναι φορείς φάγων.
- Και οι δύο φορείς φιλοξενούν ξένα ένθετα DNA.
- Και τα δύο βοηθούν στη δημιουργία βιβλιοθηκών DNA.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ των διανυσμάτων εισαγωγής και αντικατάστασης;
Insertion vs Replacement Vectors |
|
| Ο φορέας εισαγωγής είναι ένας τύπος φορέα φάγου που έχει μια περιοριστική θέση που εισάγεται στο γονιδίωμα του φάγου στη θέση του προαιρετικού DNA. | Ο φορέας αντικατάστασης είναι ένας τύπος φορέα φάγου που αναπτύχθηκε από την αφαίρεση μιας μεσαίας περιοχής «τεμαχίου πλήρωσης» του DNA φάγου |
| Μέγεθος τμημάτων εισαγωγής | |
| 05-11 kb μήκος | 08-24 kb μήκος |
| Filler Fragment | |
| Χωρίς θραύσμα πλήρωσης | Το τεμάχιο πλήρωσης αντικαθίσταται από ένα ξένο ένθετο |
| Λειτουργία | |
| Σημαντικό για τη δημιουργία βιβλιοθηκών cDNA | Σημαντικό για τη δημιουργία βιβλιοθηκών γονιδιώματος |
| Παραδείγματα | |
| GT10, GT11 και Zap είναι παραδείγματα | EMBL4 και Charon40 είναι παραδείγματα |
| Ιστότοπος διάσπασης | |
| Υπάρχει ένα μοναδικό σημείο διάσπασης | Η θέση διάσπασης περιέχει γονίδια που δεν είναι απαραίτητα για τον λυτικό κύκλο |
Σύνοψη – Εισαγωγή έναντι διανυσμάτων αντικατάστασης
Τόσο οι φορείς εισαγωγής όσο και οι φορείς αντικατάστασης είναι δύο τύποι φορέων φάγου. Και οι δύο φορείς έχουν θέσεις περιορισμού που διευκολύνουν την προσαρμογή νέων ξένων ενθέτων DNA. Οι φορείς εισαγωγής είναι σημαντικοί στη δημιουργία βιβλιοθηκών cDNA ενώ οι φορείς αντικατάστασης είναι σημαντικοί στη δημιουργία γονιδιωματικών βιβλιοθηκών. Επιπλέον, οι φορείς εισαγωγής φιλοξενούν ένθετα DNA με μέτριο μήκος. Αλλά οι φορείς αντικατάστασης μπορούν να φιλοξενήσουν μεγαλύτερα μήκη ξένων ενθέτων DNA. Συνολικά, αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ των διανυσμάτων εισαγωγής και αντικατάστασης.
