Βασική διαφορά – YAC vs BAC Vectors
Οι φορείς χρησιμοποιούνται στη μοριακή κλωνοποίηση. Ένας φορέας μπορεί να οριστεί ως ένα μόριο DNA που συμπεριφέρεται ως φορέας για τη μεταφορά ξένου γενετικού υλικού σε άλλο κύτταρο. Ένας φορέας που περιέχει ξένο DNA είναι γνωστός ως ανασυνδυασμένο DNA και θα πρέπει να έχει την ικανότητα να αναδιπλασιάζεται και να το εκφράζει εντός του οργανισμού ξενιστή. Το τεχνητό χρωμόσωμα ζυμομύκητα (YAC) και το βακτηριακό τεχνητό χρωμόσωμα (BAC) είναι δύο τύποι φορέων που εμπλέκονται στην κλωνοποίηση. Η βασική διαφορά μεταξύ YAC και BAC είναι ότι το YAC είναι ένα τεχνητά κατασκευασμένο σύστημα φορέα που χρησιμοποιεί μια συγκεκριμένη περιοχή χρωμοσώματος ζυμομύκητα για να εισάγει μεγάλα τμήματα γενετικού υλικού σε κύτταρα ζυμομύκητα ενώ το BAC είναι ένα τεχνητά κατασκευασμένο σύστημα φορέα που χρησιμοποιεί μια συγκεκριμένη περιοχή του E.χρωμόσωμα coli για την εισαγωγή μεγάλων τμημάτων DNA σε κύτταρα E. coli.
Τι είναι τα διανύσματα YAC;
Το YAC (τεχνητό χρωμόσωμα ζυμομύκητα) είναι ένα τεχνητά κατασκευασμένο χρωμόσωμα το οποίο έχει την ικανότητα να μεταφέρει ένα μεγάλο τμήμα ξένου DNA και να αναδιπλασιάζεται μέσα στα κύτταρα του ζυμομύκητα. Διαθέτει κεντρομερές, τελομερή καθώς και αυτόνομα αναδιπλασιαζόμενες αλληλουχίες που είναι απαραίτητες για την αντιγραφή και τη σταθερότητα. Το YAC θα πρέπει επίσης να φέρει έναν επιλεκτικό δείκτη ή δείκτες και θέσεις περιορισμού για να γίνει αποτελεσματικός φορέας κλωνοποίησης. Μια μεγάλη ακολουθία που κυμαίνεται από 1000 kb έως 2000 kb μπορεί να εισαχθεί στο YAC και να μεταφερθεί σε μαγιά. Η απόδοση μετασχηματισμού του YAC είναι πολύ χαμηλή.
Εικόνα 01: Διάνυσμα YAC
Τι είναι τα BAC Vectors;
Βακτηριακό τεχνητό χρωμόσωμα (BAC) είναι ένα τεχνητά κατασκευασμένο χρωμόσωμα για μοριακή κλωνοποίηση. Έχει συγκεκριμένες περιοχές του πλασμιδίου E. coli F και είναι κυκλικό και σούπερ τυλιγμένο. Το BAC αναπτύσσεται για να κλωνοποιήσει θραύσματα DNA σε βακτήρια, ειδικά σε E. coli. Μπορεί να φέρει θραύσματα DNA με μεγέθη έως 300 kb. Σε σύγκριση με το YAC, τα ένθετα κλωνοποίησης BAC είναι μικρότερα σε μεγέθη. Τα BAC αναπτύχθηκαν το 1992 και είναι ακόμα δημοφιλή λόγω της σταθερότητας και της ευκολίας κατασκευής του. Τα BAC είναι επίσης χρήσιμα στην ανάπτυξη εμβολίων.
Εικόνα 02: BAC φορέας στη μοριακή κλωνοποίηση
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ YAC και BAC Vectors;
YAC vs BAC Vectors |
|
| YAC είναι ένα γενετικά τροποποιημένο χρωμόσωμα με τη χρήση DNA ζυμομύκητα για σκοπούς κλωνοποίησης. | Το BAC είναι ένα γενετικά τροποποιημένο μόριο DNA που χρησιμοποιεί DNA E. coli για σκοπούς κλωνοποίησης. |
| Φύλο | |
| Τα YAC σχεδιάστηκαν για να κλωνοποιούν μεγάλα θραύσματα γονιδιωματικού DNA σε ζυμομύκητες. | Τα BAC αναπτύχθηκαν για την κλωνοποίηση μεγάλων γονιδιωματικών θραυσμάτων σε Escherichia coli. |
| Εισαγωγή μήκους | |
| Τα YAC μπορούν να περιέχουν γονιδιωματικά ένθετα μεγέθους μεγαβάσης.(1000 kb – 2000 kb). | τα BAC μπορούν να φέρουν ένθετα 200–300 kb ή λιγότερο. |
| Κατασκευή | |
| YAC DNA είναι δύσκολο να καθαριστεί ανέπαφο και απαιτεί υψηλή συγκέντρωση για τη δημιουργία συστήματος YAC φορέα. | Το BAC καθαρίζεται εύκολα άθικτο και μπορεί να κατασκευαστεί εύκολα. |
| Χιμαιρισμός | |
| Τα YAC είναι συχνά χιμαιρικά. | Τα BAC είναι σπάνια χιμαιρικά. |
| Σταθερότητα | |
| YAC είναι ασταθές. | Το BAC είναι σταθερό. |
| Τροποποιήσεις | |
| Ο ανασυνδυασμός μαγιάς είναι πολύ εφικτός και παραμένει πάντα ενεργός. Ως εκ τούτου, μπορεί να δημιουργήσει διαγραφές και άλλες αναδιατάξεις σε ένα YAC. | E. Ο ανασυνδυασμός coli αποτρέπεται και ενεργοποιείται όταν απαιτείται. Ως εκ τούτου, μειώνει τις ανεπιθύμητες αναδιατάξεις στα BAC. |
| Maintenance | |
| Ο χειρισμός των ανασυνδυασμένων YAC συνήθως απαιτεί τη μεταφορά YAC στο E. coli για επακόλουθο χειρισμό. Ως εκ τούτου, είναι μια επίπονη διαδικασία. | Η τροποποίηση BAC εμφανίζεται απευθείας στο E. coli. Δεν υπάρχει λοιπόν ανάγκη για μεταφορά DNA. Ως εκ τούτου, η διαδικασία δεν είναι επίπονη. |
Σύνοψη – YAC vs BAC Vectors
Το YAC έχει γίνει ένα ουσιαστικό εργαλείο έρευνας στις διαδικασίες κλωνοποίησης λόγω της ικανότητάς του να κλωνοποιεί μεγάλα θραύσματα DNA στον οργανισμό ξενιστή. Ωστόσο, τα YAC έχουν αρκετά μειονεκτήματα ως φορείς όπως δυσκολίες κατασκευής, χιμαιρισμός, αστάθεια κ.λπ. Επομένως, για να ξεπεράσουν αυτά τα προβλήματα, οι επιστήμονες έχουν αναπτύξει φορείς BAC. Το BAC έχει κατασκευαστεί χρησιμοποιώντας συγκεκριμένες περιοχές του χρωμοσώματος E. coli. Είναι ένα σταθερό διάνυσμα και μπορεί εύκολα να κατασκευαστεί. Ωστόσο, το μήκος του DNA που μπορεί να χειριστεί το BAC είναι έως και 20 φορές μικρότερο από αυτό του YAC. Αυτή είναι η διαφορά μεταξύ των διανυσματικών συστημάτων YAC και BAC. Σήμερα, το BAC προτιμάται περισσότερο από το YAC στα εργαστήρια.
