Η βασική διαφορά FPLC και HPLC είναι ότι το FPLC είναι ένας τύπος υγρής χρωματογραφίας που καθαρίζει μεγάλα βιομόρια όπως πρωτεΐνες, νουκλεοτίδια και πεπτίδια, ενώ η HPLC είναι ένας τύπος υγρής χρωματογραφίας που διαχωρίζει ενώσεις μικρού μοριακού βάρους.
Η υγρή χρωματογραφία είναι μια τεχνική που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό ενός δείγματος στα επιμέρους συστατικά του. Αυτός ο διαχωρισμός συμβαίνει λόγω της αλληλεπίδρασης συγκεκριμένων δειγμάτων με κινητές και στατικές φάσεις. Τα συστατικά μέσα σε ένα δείγμα διαχωρίζονται με βάση τη συγγένεια κάθε συστατικού για την κινητή φάση στην υγρή χρωματογραφία. Καθώς η κινητή φάση και το δείγμα περνούν μέσα από μια στήλη, τα συστατικά του δείγματος αρχίζουν να διαχωρίζονται σε ζώνες που μπορούν να ανιχνευθούν με φασματοσκοπία UV-VIS. Επομένως, η FPLC και η HPLC είναι δύο τύποι τεχνικών υγρής χρωματογραφίας.
Τι είναι το FPLC;
Το FPLC είναι ένας τύπος υγρής χρωματογραφίας που καθαρίζει μεγάλα βιομόρια όπως πρωτεΐνες, νουκλεοτίδια και πεπτίδια. Η γρήγορη υγρή χρωματογραφία πρωτεΐνης (FPLC) αναπτύχθηκε και κυκλοφόρησε για πρώτη φορά στη Σουηδία από την εταιρεία Pharmacia το 1982. Χρησιμοποιείται συχνά για την ανάλυση ή τον καθαρισμό πρωτεϊνικών μιγμάτων. Αυτό λαμβάνει χώρα με βάση την αρχή της συγγένειας των συστατικών του δείγματος για κινούμενο ρευστό (κινητή φάση) και πορώδες στερεό υλικό (στάσιμη φάση). Στο FPLC, η κινητή φάση είναι ένα ρυθμιστικό διάλυμα και η στατική φάση είναι μια ρητίνη που αποτελείται από σφαιρίδια. Συνήθως αποτελείται από διασυνδεδεμένη αγαρόζη συσκευασμένη σε κυλινδρική γυάλινη ή πλαστική στήλη.
Εικόνα 01: Συσκευή FLPC (Fast Protein Liquid Chromatography)
Στο μεγαλύτερο μέρος της στρατηγικής FLPC, χρησιμοποιείται ρητίνη ανταλλαγής ιόντων. Επομένως, η πρωτεΐνη που ενδιαφέρει θα συνδεθεί με τη ρητίνη με μια αλληλεπίδραση φορτίου. Η τεχνική FLPC χρησιμοποιεί επίσης δύο buffer: buffer 1 (το τρέχον buffer) και buffer 2 (the elution buffer). Αρχικά, όταν το ρυθμιστικό διάλυμα και το μείγμα δείγματος τρέχουν μέσα από τη στήλη, η πρωτεΐνη που ενδιαφέρει στο μείγμα θα δεσμευτεί στη ρητίνη με μια αλληλεπίδραση φορτίου. Αλλά η πρωτεΐνη που ενδιαφέρει διασπάται και επιστρέφει στο διάλυμα σε ρυθμιστικό διάλυμα έκλουσης όταν το ρυθμιστικό διάλυμα έκλουσης διατρέχει τη στήλη στο τέλος της διαδικασίας. Αργότερα, το διάλυμα (έκλουσμα που περιέχει πρωτεΐνη ενδιαφέροντος) περνά από δύο ανιχνευτές, οι οποίοι μετρούν τη συγκέντρωση άλατος και τη συγκέντρωση πρωτεΐνης. Καθώς κάθε πρωτεΐνη εκλούεται, εμφανίζεται ως «αιχμή» κατά την ανίχνευση και μπορεί να συλλεχθεί για περαιτέρω χρήση.
Τι είναι το HPLC;
Το HPLC είναι ένας τύπος υγρής χρωματογραφίας που διαχωρίζει ενώσεις μικρού μοριακού βάρους. Το 1969, η πρώτη HPLC κατασκευάστηκε εμπορικά από την Waters Corporation, ΗΠΑ. Στην υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC), ένα μείγμα δείγματος (αναλύτης) σε διαλύτη (κινητή φάση) αντλείται μέσω στήλης με χρωματογραφικό υλικό πλήρωσης (στάσιμη φάση) σε υψηλή πίεση. Το μίγμα του δείγματος μεταφέρεται από ένα κινούμενο ρεύμα φέροντος αερίου ηλίου ή αζώτου.
Εικόνα 02: HPLC (Υγρή Χρωματογραφία Υψηλής Απόδοσης)
Τα συστατικά του μείγματος δείγματος που έχουν τη μικρότερη ποσότητα αλληλεπίδρασης με τη στατική φάση ή τη μεγαλύτερη ποσότητα αλληλεπίδρασης με την κινητή φάση θα εξέλθουν από τη στήλη γρηγορότερα. Από την άλλη πλευρά, τα συστατικά του μείγματος δείγματος που έχουν τη μεγαλύτερη ποσότητα αλληλεπίδρασης με τη στατική φάση ή τη μικρότερη ποσότητα αλληλεπίδρασης με την κινητή φάση θα εξέλθουν από τη στήλη πιο αργά. Με βάση την παραπάνω αρχή αλληλεπίδρασης, τα συστατικά του μείγματος δείγματος μπορούν να διαχωριστούν. Επιπλέον, ο ανιχνευτής οργάνου αναγνωρίζει κάθε συστατικό του μείγματος δείγματος που εξέρχεται από τη στήλη. Η HPLC χρησιμοποιείται για την επιθεώρηση περιβαλλοντικών και βιολογικών δειγμάτων για παρουσία ή απουσία γνωστών ενώσεων, όπως φάρμακα, τοξίνες ή φυτοφάρμακα. Χρησιμοποιείται σε διαφορετικές βιομηχανίες όπως φαρμακευτικές, περιβαλλοντικές, εγκληματολογικές και χημικές ουσίες.
Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ FPLC και HPLC;
- FPLC και HPLC είναι τύποι υγρής χρωματογραφίας.
- Χρησιμοποιούνται και τα δύο για διαχωρισμό και ταυτοποίηση βιολογικών δειγμάτων.
- Έχουν μια υγρή κινητή φάση και μια στερεά στατική φάση.
- Και οι δύο τεχνικές χρησιμοποιούν μια στήλη για να περάσουν από το δείγμα.
- Αυτές οι τεχνικές χρησιμοποιούν αντλίες, ανιχνευτές, βαλβίδες και λογισμικό για διαχωρισμό και ανίχνευση δειγμάτων.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ FPLC και HPLC;
Το FPLC είναι ένας τύπος υγρής χρωματογραφίας που χρησιμοποιείται για τον καθαρισμό μεγάλων βιομορίων όπως πρωτεΐνες, νουκλεοτίδια και πεπτίδια. Η HPLC είναι ένας τύπος υγρής χρωματογραφίας που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό ενώσεων μικρού μοριακού βάρους. Έτσι, αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ FPLC και HPLC. Επιπλέον, το FPLC χρησιμοποιεί οθόνες pH και αγωγιμότητας καθώς και πηγάδια ως συλλέκτες κλασμάτων. Αντίθετα, η HPLC δεν χρησιμοποιεί συσκευές παρακολούθησης pH και αγωγιμότητας και συλλέκτες κλασμάτων.
Το παρακάτω infographic παραθέτει περισσότερες διαφορές μεταξύ FPLC και HPLC σε μορφή πίνακα.
Σύνοψη – FPLC vs HPLC
Η χρωματογραφία είναι μια εργαστηριακή αναλυτική τεχνική που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό συστατικών από ένα μείγμα. Χωρίζεται σε διάφορους τύπους όπως χρωματογραφία στήλης, αέρια χρωματογραφία, υγρή χρωματογραφία, χρωματογραφία ανταλλαγής ιόντων κ.λπ. Οι FPLC και HPLC είναι δύο τύποι τεχνικών υγρής χρωματογραφίας. Το FPLC είναι ένας τύπος υγρής χρωματογραφίας που χρησιμοποιείται για τον καθαρισμό μεγάλων βιομορίων όπως πρωτεΐνες, νουκλεοτίδια και πεπτίδια. Από την άλλη πλευρά, η HPLC είναι ένας τύπος υγρής χρωματογραφίας που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό ενώσεων μικρού μοριακού βάρους. Έτσι, αυτή είναι η περίληψη της διαφοράς μεταξύ FPLC και HPLC.
