Η βασική διαφορά μεταξύ HPLC και γρήγορης HPLC είναι ότι η πίεση της αντλίας που χρησιμοποιούμε για HPLC είναι περίπου 40 MPa ενώ η πίεση της αντλίας για γρήγορη HPLC είναι περίπου 3-5 MPa.
Η πιο κοινή τεχνική που χρησιμοποιούμε για τον διαχωρισμό των συστατικών ενός μείγματος είναι η «υγρή χρωματογραφία». Υπάρχουν διάφορες τεχνικές για την επίτευξη αυτού του σκοπού, από τις οποίες η HPLC είναι πολύ δημοφιλής. Το HPLC σημαίνει Υγρή Χρωματογραφία Υψηλής Απόδοσης που προσδιορίζει, ποσοτικοποιεί και διαχωρίζει τα συστατικά ενός υγρού μείγματος με γρήγορο και αποτελεσματικό τρόπο. Η γρήγορη HPLC είναι μια ειδική εφαρμογή της HPLC η οποία έχει τραβήξει τελευταία την προσοχή όσων ασχολούνται με τη μελέτη διαλυμάτων.
Τι είναι το HPLC;
Η HPLC είναι υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης. Χρησιμοποιεί υψηλή πίεση για να ωθήσει τους διαλύτες έτσι ώστε να περάσουν μέσα από μια στήλη. Επίσης, είναι ένας ιδανικός τρόπος διαχωρισμού και μελέτης διαφόρων ενώσεων όπως αμινοξέα, νουκλεϊκά οξέα, υδατάνθρακες, στεροειδή, αντιβιοτικά και υδρογονάνθρακες. Η HPLC έχει πολλά πλεονεκτήματα έναντι άλλων μεθόδων διαχωρισμού μιγμάτων όπως υψηλότερη ανάλυση και ταχύτερη ανάλυση. Εξουδετερώνει την ανάγκη για επανασυσκευασία και αναγέννηση και προσφέρει καλύτερο έλεγχο των παραμέτρων και έτσι αυξάνει την αποτελεσματικότητα του διαχωρισμού. Ιδανικά, το HPLC είναι κατάλληλο για εφαρμογές μεγάλης κλίμακας, καθώς μπορεί να διαχωρίσει πολύ μικρά σωματίδια και επιτρέπει τη χρήση υψηλών πιέσεων που διευκολύνουν την εύκολη ροή των διαλυτών.
Εικόνα 01: Στήλη HPLC
Συνοπτικά, η μέθοδος λειτουργίας της τεχνικής HPLC είναι η εξής. Αρχικά, θα πρέπει να εισάγουμε το δείγμα στο ρεύμα της κινητής φάσης σε διακριτές μικρές ποσότητες χρησιμοποιώντας μια αντλία. Η πίεση της αντλίας πρέπει να διατηρείται στα 40 MPa. Αυτό το ρεύμα κινητής φάσης διηθείται μέσω της στήλης HPLC. Στη συνέχεια, τα συστατικά του δείγματος περνούν επίσης από τη στήλη. Ωστόσο, οι ταχύτητες κίνησής τους διαφέρουν μεταξύ τους λόγω της διαφοράς στις αλληλεπιδράσεις μεταξύ των συστατικών του δείγματος και του προσροφητικού μέσα στη στήλη. Ονομάζουμε αυτό το προσροφητικό ως ακίνητη φάση επειδή βρίσκεται μέσα στη στήλη (δεν κινείται). Στη συνέχεια, στο τέλος της στήλης, μπορούμε να συλλέξουμε το δείγμα που εκλούεται από τη στήλη, επομένως, μπορούμε να συλλέξουμε τα συστατικά στο δείγμα ξεχωριστά.
Τι είναι το Fast HPLC;
Πρόσφατα, ερευνητές στο ερευνητικό ινστιτούτο Schering Plough ανέπτυξαν μια τεχνική ταχείας HPLC που είναι μια προηγμένη έκδοση της HPLC, καθώς επιτρέπει ακόμη πιο γρήγορο διαχωρισμό των ενώσεων από ένα μείγμα. Επίσης, γνωστή ως γρήγορη HPLC, αυτή η τεχνική χρησιμοποιεί σωματίδια πυριτίου συντηγμένου πυρήνα 2,7 um που παράγονται με σύντηξη πορώδους πυριτίου 0,5 um πάνω από σωματίδιο στερεού πυριτίου. Αυτά τα μοναδικά κατασκευασμένα σωματίδια κάνουν τη διαδικασία διαχωρισμού πολύ γρήγορη και μάλιστα σε χαμηλή αντίθλιψη από αυτή που χρησιμοποιούμε στην HPLC.
Εικόνα 02: Συσκευή FPLC
Η γρήγορη HPLC έχει αποτελέσματα συγκρίσιμα με την UPLC, αλλά οι επιστήμονες θεωρούν ότι αυτή η τεχνική είναι ανώτερη καθώς δεν απαιτεί πολύ ακριβό εξοπλισμό υπερυψηλής πίεσης. Αυτό που είναι υπέροχο είναι ότι η γρήγορη HPLC δεν απαιτεί νέα εργαστηριακά πρωτόκολλα.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ HPLC και γρήγορης HPLC;
Η HPLC είναι υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης και η γρήγορη HPLC είναι μια προηγμένη μορφή υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης. Η βασική διαφορά μεταξύ HPLC και γρήγορης HPLC είναι ότι η πίεση της αντλίας που χρησιμοποιούμε για την HPLC είναι περίπου 40 MPa. Ενώ, η πίεση της αντλίας για γρήγορη HPLC είναι περίπου 3-5 MPa. Επιπλέον, μπορούμε να διαχωρίσουμε διάφορες ενώσεις όπως αμινοξέα, νουκλεϊκά οξέα, υδατάνθρακες, στεροειδή, αντιβιοτικά και υδρογονάνθρακες χρησιμοποιώντας την τεχνική HPLC ενώ η τεχνική γρήγορης HPLC χρησιμοποιείται κυρίως για τον διαχωρισμό πρωτεϊνών.
Το παρακάτω infographic παρουσιάζει περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τη διαφορά μεταξύ HPLC και γρήγορης HPLC.
Σύνοψη – HPLC vs Fast HPLC
Το HPLC είναι μια τεχνική υγρής χρωματογραφίας που έχει γίνει πολύ δημοφιλής σε όλο τον κόσμο. Το Fast HPLC είναι μια νέα έκδοση του HPLC, οι ερευνητές του Ινστιτούτου Schering Plough ανέπτυξαν αυτή τη νέα τεχνική. Η βασική διαφορά μεταξύ HPLC και γρήγορης HPLC έγκειται στην πίεση της αντλίας που χρησιμοποιούμε για τον διαχωρισμό. Αυτό είναι; η πίεση της αντλίας που χρησιμοποιούμε για HPLC είναι περίπου 40 MPa. Όμως, η πίεση της αντλίας για γρήγορη HPLC είναι περίπου 3-5 MPa.
