Η βασική διαφορά μεταξύ NAAT και PCR είναι ότι το NAAT είναι μια μέθοδος που ενισχύει το γενετικό υλικό χρησιμοποιώντας διάφορους τρόπους, συμπεριλαμβανομένης της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης, της μετατόπισης κλώνου ή της ενίσχυσης που προκαλείται από μεταγραφή, ενώ η PCR είναι μια μέθοδος που ενισχύει το γενετικό υλικό χρησιμοποιώντας μόνο θερμικός κύκλος.
Τα παθογόνα αναγνωρίζονται κυρίως από την ενίσχυση του γενετικού τους υλικού. Οι περισσότερες από τις τεχνικές σε αυτόν τον τομέα επικεντρώνονται στην ανίχνευση του γενετικού υλικού του παθογόνου με την ενίσχυση συγκεκριμένων αλληλουχιών σε πραγματικό χρόνο. Επομένως, τα αποτελέσματα παράγονται πολύ γρήγορα στο διαγνωστικό πλαίσιο. Οι NAAT, PCR, βιοαισθητήρες και LCR είναι διάφορες τεχνικές που χρησιμοποιούνται στα εργαστήρια για την ενίσχυση του γενετικού υλικού του παθογόνου.
Τι είναι το NAAT;
Η δοκιμή ενίσχυσης νουκλεϊκού οξέος (NAAT) είναι μια μέθοδος στη μοριακή βιολογία που ενισχύει το γενετικό υλικό χρησιμοποιώντας διάφορους τρόπους όπως η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης, η ενίσχυση μετατόπισης κλώνου ή η ενίσχυση που προκαλείται από μεταγραφή. Η ενίσχυση του γενετικού υλικού μπορεί επίσης να γίνει μέσω τεχνικών όπως η αλυσιδωτή αντίδραση απολίνωσης και η αντίδραση διακλαδισμένου DNA (quantiplex b DNA) στη διαδικασία NAAT. Το NAAT χρησιμοποιεί την ειδικότητα του ζεύγους βάσεων Watson-Crick. Στη διαδικασία NAAT, ένας μονόκλωνος ανιχνευτής ή μόριο εκκινητή υβριδοποιείται με το μόριο DNA ή RNA στόχο. Επομένως, ο σχεδιασμός του κλώνου ανιχνευτή είναι πολύ σημαντικός για την ενίσχυση της ευαισθησίας και της ειδικότητας της ανίχνευσης. Στη συνέχεια, το επόμενο βήμα του NAAT ενισχύει το γενετικό υλικό δημιουργώντας πολλά αντίγραφά του για ανίχνευση.
Εικόνα 01: NAAT
Το NAAT εφαρμόζεται επί του παρόντος για την ανίχνευση αρκετών παθογόνων παραγόντων όπως η Neisseria gonorrhea, το Chlamydia trachomatis, το Mycobacterium tuberculosis και το SARS-COV2. Επιπλέον, η δοκιμή NAAT έχει αναπτυχθεί για να συντομεύσει την περίοδο παραθύρου. Η περίοδος παραθύρου είναι η χρονική περίοδος από τη στιγμή που ένας ασθενής έχει μολυνθεί και όταν εμφανίζεται ως θετικός από τις δοκιμές αντισωμάτων. Επιπλέον, η μέθοδος διαλογής NAAT εγκρίθηκε για πρώτη φορά το 1999 από τον FDA. Το NAAT έχει πολλά πλεονεκτήματα, όπως η ανίχνευση χαμηλών επιπέδων DNA ή RNA, υψηλή ευαισθησία και υψηλή ειδικότητα.
Τι είναι η PCR;
Η PCR είναι μια μέθοδος στη μοριακή βιολογία που ενισχύει το γενετικό υλικό χρησιμοποιώντας μόνο θερμικό κύκλο. Το PCR σημαίνει αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης. Είναι μια δοκιμή για την ανίχνευση γενετικού υλικού από έναν συγκεκριμένο οργανισμό όπως βακτήρια, μύκητες και ιούς. Στη διάγνωση της νόσου, η PCR ανιχνεύει την παρουσία παθογόνου αν το άτομο έχει παθογόνο τη στιγμή της εξέτασης. Στη διάγνωση της νόσου, το πρωτόκολλο PCR έχει πολλά στάδια, συμπεριλαμβανομένης της συλλογής δείγματος, της εξαγωγής DNA, της PCR και της αλληλούχισης. Κατά τον έλεγχο παθογόνων, το δείγμα που συλλέγεται χρησιμοποιείται για την εξαγωγή γενετικού υλικού (DNA ή RNA). Η διαδικασία PCR απαιτεί ειδικές χημικές ουσίες, εκκινητές και ένζυμα προκειμένου να παραχθούν εκατομμύρια αντίγραφα γενετικού υλικού μέσα στη μηχανή PCR που ονομάζεται θερμικός κυκλοποιητής. Μόλις ενισχυθεί από το προϊόν PCR, το παθογόνο μπορεί να ανιχνευθεί. Οι επιστήμονες χρησιμοποιούν ειδικό λογισμικό για να ερμηνεύσουν τα αποτελέσματα.
Εικόνα 02: PCR
Επιπλέον, υπάρχουν διάφοροι τύποι PCR που χρησιμοποιούνται επί του παρόντος στην έρευνα. Η RT-PCR, η Multiplex PCR, η RAPD και η Nested PCR είναι πολλές μεταξύ τους. Η PCR είναι χρήσιμη ιδιαίτερα στην ανίχνευση της φαρυγγίτιδας (στρεπτοκοκκική φαρυγγίτιδα), της άτυπης πνευμονίας (Chlymydia pneumoniae), της ιλαράς (Morbillivirus), της ηπατίτιδας (HBV) και της ελκώδους ουρογεννητικής λοίμωξης (Haemophilus ducreyi).
Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ NAAT και PCR;
- NAAT και PCR είναι δύο σημαντικές μοριακές βιολογικές μέθοδοι που χρησιμοποιούνται για την ενίσχυση του γενετικού υλικού.
- Τα νουκλεϊκά οξέα (DNA ή RNA) ενισχύονται και με τις δύο τεχνικές.
- Είναι γρήγορες και γρήγορες τεχνικές.
- Και οι δύο τεχνικές χρησιμοποιούνται επί του παρόντος για τη διάγνωση της νόσου.
- Είναι ακριβές από τις συμβατικές μεθόδους.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ NAAT και PCR;
Το NAAT είναι μια μέθοδος στη μοριακή βιολογία που ενισχύει το γενετικό υλικό χρησιμοποιώντας διάφορες μεθόδους, ενώ η PCR είναι μια μέθοδος στη μοριακή βιολογία που ενισχύει το γενετικό υλικό χρησιμοποιώντας μόνο θερμικό κύκλο. Το NAAT χρησιμοποιεί διαφορετικές τεχνικές ενίσχυσης γενετικού υλικού, όπως αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης, ενίσχυση μετατόπισης κλώνου, ενίσχυση με μεσολάβηση μεταγραφής, αλυσιδωτή αντίδραση απολίνωσης και αντίδραση διακλαδισμένου DNA (quantiplex b DNA). Από την άλλη πλευρά, η PCR χρησιμοποιεί διαφορετικές τεχνικές ενίσχυσης γενετικού υλικού όπως η RT-PCR. Multiplex PCR, RAPD, Nested PCR. Έτσι, αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ NAAT και PCR.
Το παρακάτω infographic παρουσιάζει τις διαφορές μεταξύ NAAT και PCR σε μορφή πίνακα για σύγκριση δίπλα-δίπλα.
Σύνοψη – NAAT vs PCR
Υπάρχουν διάφορα μοριακά βιολογικά εργαλεία που χρησιμοποιούνται σε εργαστήρια για την ενίσχυση γενετικών υλικών. NAAT, PCR, βιοαισθητήρας και LCR είναι αρκετές τέτοιες τεχνικές. Το NAAT είναι μια μοριακή βιολογική τεχνική που ενισχύει το γενετικό υλικό χρησιμοποιώντας διάφορους τρόπους όπως η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης, η μετατόπιση κλώνου ή η ενίσχυση που προκαλείται από μεταγραφή. Η PCR είναι μια μέθοδος στη μοριακή βιολογία που ενισχύει το γενετικό υλικό χρησιμοποιώντας θερμικό κύκλο. Έτσι, αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ NAAT και PCR.
