Βασική διαφορά – Άμεση έναντι Έμμεσης ELISA
Μια ενζυμική ανοσοδοκιμασία (ELISA), γνωστή και ως ενζυμική ανοσοδοκιμασία, είναι μια ορολογική εξέταση που ανιχνεύει αντισώματα στο αίμα. Χρησιμοποιείται ως διαγνωστικό εργαλείο για να διαπιστωθεί εάν ο ασθενής έχει εκτεθεί σε συγκεκριμένο τύπο ιού ή άλλο μολυσματικό παράγοντα (αντιγόνο) και εάν ο οργανισμός έχει παράγει αντισώματα κατά της λοίμωξης. Η ELISA μπορεί επίσης να αναγνωρίσει τις προηγούμενες και τις τρέχουσες λοιμώξεις. Ως εκ τούτου, η ELISA χρησιμοποιείται συχνά ως δοκιμασία προληπτικού ελέγχου από τους γιατρούς πριν από τη σε βάθος ανάλυση των ασθενειών. Αυτή η εξέταση μπορεί να πραγματοποιηθεί στο εργαστήριο με λήψη δείγματος αίματος από τον ασθενή. Υπάρχουν δύο τύποι δοκιμής ELISA: η άμεση και η έμμεση ELISA. Η βασική διαφορά μεταξύ άμεσης και έμμεσης ELISA είναι ότι η έμμεση ELISA είναι πιο ευαίσθητη και απαιτεί την προσθήκη δευτερεύοντος αντισώματος ενώ η άμεση ELISA είναι λιγότερο ευαίσθητη και χρησιμοποιεί μόνο ένα πρωτεύον αντίσωμα.
Τι είναι η Direct ELISA;
Το ELISA είναι μια διαγνωστική εξέταση ασθενειών που εκτελείται για τον εντοπισμό της παρουσίας συγκεκριμένων αντιγόνων ή αντισωμάτων στο αίμα. Γίνεται ως δοκιμασία πλακών. Χρησιμοποιεί αντισώματα που συνδέονται με εύκολα προσδιοριζόμενα ένζυμα. Η παρουσία αντιγόνων στο δείγμα ορού συνδέεται με συγκεκριμένα αντισώματα που συνδέονται με ένζυμα. Στο τελικό στάδιο, προστίθεται ένα συγκεκριμένο υπόστρωμα για να αντιδράσει με το ένζυμο. Το ένζυμο μετατρέπει το υπόστρωμα σε έγχρωμο προϊόν ή προϊόν που παράγει σήμα. Η αλλαγή χρώματος στο χημικό υπόστρωμα αποκαλύπτει την παρουσία ενός συγκεκριμένου αντισώματος στο δείγμα ορού. Η άμεση δοκιμή ELISA χρησιμοποιεί μόνο ένα πρωτεύον αντίσωμα συνδεδεμένο με το ένζυμο. Όταν δεσμεύεται με το αντιγόνο, αλλάζει γρήγορα το χρώμα, υποδηλώνοντας την παρουσία του μολυσματικού παράγοντα στο αίμα. Ωστόσο, η ένταση των σημάτων είναι ασθενέστερη στην άμεση ELISA αφού οι επίτοποι περιορίζονται στη δέσμευση των αντιγόνων. Ως εκ τούτου, η άμεση ELISA είναι λιγότερο ευαίσθητη σε σύγκριση με την έμμεση ELISA.
Εικόνα 01: Άμεση δοκιμή ELISA
Τι είναι η Έμμεση ELISA;
Το ELISA μπορεί να πραγματοποιηθεί χρησιμοποιώντας δύο τύπους αντισωμάτων και συγκεκριμένα. πρωτογενές αντίσωμα και δευτερεύον αντίσωμα. Το εργαλείο έμμεσης ELISA χρησιμοποιεί και τους δύο τύπους αντισωμάτων για να ενισχύσει τα σήματα για καλύτερη ανίχνευση. Η τεχνική έμμεσης ELISA εκτελείται ως εξής.
- Οι πλάκες επωάζονται με αντιγόνα και πλένονται για να αποκλειστεί η μη ειδική δέσμευση.
- Στη συνέχεια προστίθενται πρωτογενή αντισώματα και πλένονται.
- Δευτερογενές αντίσωμα συνδεδεμένο με ένζυμα προστίθενται και πλένονται.
- Ένα υπόστρωμα προστίθεται και αφήνεται να αντιδράσει με ένζυμα.
- Εντοπίζονται σήματα και εντοπίζεται η παρουσία ή η απουσία του συγκεκριμένου αντιγόνου στο δείγμα.
Σε έμμεση δοκιμή ELISA, πολλά δευτερεύοντα αντισώματα μπορούν να συνδεθούν σε ένα μόνο πρωτογενές αντίσωμα. Τα δευτερογενή αντισώματα συνδέονται με ένζυμα που προσδιορίζονται εύκολα. Επομένως, μια σύνδεση μπορεί να δώσει ένα ισχυρό σήμα λόγω περισσότερων της μιας αλληλεπιδράσεων. Ως εκ τούτου, η έμμεση ELISA είναι πιο ευαίσθητη από την άμεση ELISA. Ωστόσο, η έμμεση ELISA μπορεί να δώσει μη ειδικά σήματα λόγω διασταυρούμενων αντιδράσεων των δευτερογενών αντισωμάτων.
Εικόνα 02: Έμμεση δοκιμή ELISA
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ Άμεσης και Έμμεσης ELISA;
Άμεση vs Έμμεση ELISA |
|
| Η άμεση ELISA είναι λιγότερο ευαίσθητη σε σύγκριση με την έμμεση ELISA. | Η έμμεση ELISA είναι πιο ευαίσθητη. |
| Χρόνος που λήφθηκε | |
| Η άμεση εξέταση ELISA είναι μια γρήγορη διαδικασία. | Έμμεση ELISA είναι χρονοβόρα. |
| Χρήση αντισωμάτων | |
| Μόνο ένας τύπος αντισωμάτων (πρωτογενή αντισώματα) χρησιμοποιείται στην άμεση ELISA. | Πρωτεύοντα και δευτερογενή αντισώματα χρησιμοποιούνται για έμμεση ELISA. |
| Σύνδεσμος με ένζυμα | |
| Τα πρωτογενή αντισώματα συνδέονται με ένζυμα. | Τα δευτερογενή αντισώματα συνδέονται με ένζυμα. |
| Διασταυρούμενη αντιδραστικότητα δεύτερων αντισωμάτων | |
| Η άμεση ELISA εξαλείφει τη διασταυρούμενη αντιδραστικότητα των δεύτερων αντισωμάτων. | Η έμμεση ELISA επηρεάζεται με διασταυρούμενη αντιδραστικότητα των δεύτερων αντισωμάτων. |
| Σήματα | |
| Τα σήματα είναι αδύναμα σε σύγκριση με την έμμεση ELISA. | Τα σήματα ενισχύονται με έμμεση ELISA. Ως εκ τούτου, είναι εύκολο να εντοπιστεί. |
Σύνοψη – Άμεση έναντι Έμμεσης ELISA
Το ELISA είναι μια βιοχημική τεχνική που χρησιμοποιείται κυρίως στην ανοσολογία για την ανίχνευση της παρουσίας ενός αντισώματος ή ενός αντιγόνου σε δείγμα αίματος ενός ασθενούς. Μπορεί να πραγματοποιηθεί μέσω δύο διαδικασιών γνωστών ως άμεση ή έμμεση ELISA. Η άμεση δοκιμή ELISA χρησιμοποιεί μόνο πρωτογενή αντισώματα για την ανίχνευση του αντιγόνου ενώ η έμμεση ELISA χρησιμοποιεί τόσο πρωτογενή όσο και δευτερογενή αντισώματα. Στην άμεση ELISA, τα πρωτογενή αντισώματα επισημαίνονται ενώ στην έμμεση ELISA επισημαίνονται τα δευτερεύοντα αντισώματα. Αυτή είναι η διαφορά μεταξύ άμεσης και έμμεσης ELISA.
