Βασική διαφορά – Gram Stain vs Acid Fast
Τα βακτήρια είναι πολύ μικροί μικροοργανισμοί. Είναι διαφανή και η ανίχνευσή τους είναι δύσκολη σε συνθήκες διαβίωσης και χωρίς λεκέδες. Έτσι, αναπτύσσονται διάφορες μέθοδοι χρώσης για τη διευκόλυνση της ανίχνευσης βακτηρίων. Υπάρχουν τρεις κύριοι τύποι τεχνικών χρώσης: απλή χρώση, διαφορική χρώση και δομική χρώση. Η διαφορική χρώση είναι μια τεχνική που χρησιμοποιεί περισσότερες από μία κηλίδες για τη διαφοροποίηση των βακτηρίων. Η χρώση με γραμμάρια και η οξεία χρώση είναι ευρέως γνωστές ως διαφορικές λεκέδες. Η χρώση κατά Gram είναι μια τεχνική διαφορικής χρώσης, η οποία διαχωρίζει τα βακτήρια σε δύο ομάδες γνωστές ως θετικά κατά Gram και αρνητικά κατά Gram βακτήρια. Η οξεοταχεία χρώση είναι μια διαφορική χρώση που χρησιμοποιείται για την αναγνώριση οργανισμών με οξύτητα, όπως το Mycobacterium, από μη όξινους οργανισμούς. Αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ του Gram Stain και του Acid Fast.
Τι είναι Gram Stain;
Η χρώση Gram είναι μια σημαντική τεχνική διαφορικής χρώσης που χρησιμοποιείται για την ταυτοποίηση βακτηρίων στη μικροβιολογία. Αυτή η τεχνική εισήχθη από τον Δανό βακτηριολόγο Hans Christian Gram το 1884. Η χρώση κατά Gram κατηγοριοποιεί τα βακτήρια σε δύο μεγάλες ομάδες που ονομάζονται gram θετικές και gram αρνητικές, οι οποίες είναι πολύ σημαντικές για την ταξινόμηση και την αναγνώριση των βακτηρίων. Οι μικροβιολόγοι πραγματοποιούν χρώση gram ως αρχικό βήμα στον χαρακτηρισμό των βακτηρίων κατά τη διάρκεια των μελετών τους.
Τα βακτήρια ομαδοποιούνται με βάση τις διαφορές στο κυτταρικό τους τοίχωμα. Τα θετικά κατά Gram βακτήρια αποτελούνται από ένα παχύ στρώμα πεπτιδογλυκάνης στο κυτταρικό τους τοίχωμα ενώ τα αρνητικά κατά Gram βακτήρια αποτελούνται από ένα λεπτό στρώμα πεπτιδογλυκάνης στο κυτταρικό τους τοίχωμα. Το αποτέλεσμα της χρώσης gram θα βασίζεται στη διαφορά στο πάχος της στιβάδας πεπτιδογλυκάνης του κυτταρικού τοιχώματος.
Η χρώση σε γραμμάρια πραγματοποιείται χρησιμοποιώντας τέσσερα διαφορετικά αντιδραστήρια και συγκεκριμένα. πρωτεύον λεκέ, μυρωδάτο, αποχρωματιστικό και αντιλεκέ. Η κρυσταλλική βιολέτα και η σαφρανίνη χρησιμοποιούνται ως πρωταρχικοί και αντικλεπτικοί λεκέδες, αντίστοιχα, ενώ γραμμάρια ιωδίου και 95% αλκοόλ χρησιμοποιούνται ως μυριστικό και αποχρωματιστικό, αντίστοιχα. Τα βασικά βήματα της χρώσης σε γραμμάρια είναι τα εξής:
- Ένα βακτηριακό επίχρισμα παρασκευάζεται σε μια καθαρή γυάλινη πλάκα, σταθεροποιείται θερμικά και ψύχεται.
- Το επίχρισμα πλημμυρίζει με κρυσταλλική βιολέτα για 1 – 2 λεπτά.
- Το επίχρισμα ξεπλένεται με αργό τρεχούμενο νερό βρύσης για να αφαιρεθούν οι υπερβολικοί λεκέδες.
- Γραμάρια ιωδίου εφαρμόζεται στο επίχρισμα για 1 λεπτό.
- Το επίχρισμα ξεπλένεται με αργό τρεχούμενο νερό βρύσης
- Το επίχρισμα πλένεται με 95% οινόπνευμα για 2 – 5 δευτερόλεπτα και ξεπλένεται με αργό τρεχούμενο νερό βρύσης.
- Το επίχρισμα βάφεται αντίθετα με σαφρανίνη για 1 λεπτό
- Το επίχρισμα ξεπλένεται με αργό τρεχούμενο νερό βρύσης, στεγνώνει και παρατηρείται στο μικροσκόπιο.
Στο τέλος της χρώσης gram, τα αρνητικά κατά gram βακτήρια θα παρατηρηθούν σε ροζ χρώμα ενώ τα θετικά κατά γραμμάρια βακτήρια θα παρατηρηθούν σε μοβ χρώμα.
Εικόνα 01: Gram αρνητικά και Gram θετικά βακτήρια
Το αποτέλεσμα της χρώσης σε γραμμάρια καθορίζεται από το πάχος του στρώματος πεπτιδογλυκάνης στο κυτταρικό τους τοίχωμα. Κατά τη διάρκεια του βήματος αποχρωματισμού, ο πρωταρχικός λεκές και το μυρωδάτο αφαιρούνται εύκολα από τα gram αρνητικά βακτήρια και γίνονται άχρωμα αφού έχουν ένα λεπτό στρώμα πεπτιδογλυκάνης. Η πρωταρχική κηλίδα διατηρείται στα θετικά κατά gram βακτήρια αφού έχουν ένα παχύ στρώμα πεπτιδογλυκάνης. Η αντίθετη χρώση δεν θα είναι αποτελεσματική για τα θετικά κατά Gram βακτήρια λόγω της διατήρησης της κύριας κηλίδας. Έτσι, τα θετικά κατά γραμμάρια βακτήρια θα είναι ορατά στο πρωτεύον χρώμα λεκέ, δηλαδή στο μωβ χρώμα. Η αντίθετη κηλίδα θα λερώσει τα αρνητικά κατά Gram βακτήρια και θα είναι ορατά με το χρώμα της επιλογής, που είναι το χρώμα της σαφρανίνης. Ως εκ τούτου, είναι εύκολο να κατηγοριοποιηθούν τα βακτήρια σε δύο ομάδες ανά γραμμάριο χρώσης και είναι πολύτιμο για τη διαφοροποίηση και την ταυτοποίηση βακτηρίων.
Τι είναι το Acid Fast;
Η ανθεκτικότητα στα οξέα είναι μια φυσική ιδιότητα ορισμένων βακτηρίων, συγκεκριμένα η αντοχή τους στον αποχρωματισμό από οξέα κατά τη διάρκεια των διαδικασιών χρώσης. Μόλις χρωματιστούν, αυτοί οι οργανισμοί αντιστέκονται στις διαδικασίες αποχρωματισμού με βάση το αραιό οξύ ή ή την αιθανόλη που είναι κοινές σε πολλά πρωτόκολλα χρώσης. Έτσι, το όνομα «acid fast» δίνεται σε αυτούς τους οργανισμούς. Αυτή η ιδιότητα φαίνεται λόγω του ότι έχουν υψηλό επίπεδο κηρώδους υλικού (μυκολικά οξέα) στα κυτταρικά τους τοιχώματα. Αυτή η εξέταση είναι κρίσιμη για την ταυτοποίηση του Mycobacterium tuberculosis.
Εικόνα 2: Acid Fast Mycobacteria
Αυτή η οξέως γρήγορη χρώση αναπτύχθηκε από τον Paul Ehrlich το 1882. Η τεχνική γρήγορης οξέος του Ehrlich τροποποιήθηκε από τον Ziehl-Neelsen και χρησιμοποιείται τώρα πιο συχνά. Η διαδικασία ταχείας χρώσης με οξύ περιλαμβάνει τρία διαφορετικά αντιδραστήρια. Το Carbol fuschin χρησιμοποιείται ως κύριος λεκές. Ως αποχρωματιστικός παράγοντας χρησιμοποιείται η όξινη αλκοόλη. Το μπλε του μεθυλενίου χρησιμοποιείται ως αντιλεκτικό. Η διαδικασία χρώσης εκτελείται ως εξής.
- Η κύρια χρώση (carbol fuchsin) εφαρμόζεται στο σταθερό δείγμα στη διαφάνεια (Όλα τα κύτταρα θα χρωματιστούν με κόκκινο χρώμα).
- Η αντικειμενοφόρος πλάκα θερμαίνεται με ατμό για 5 λεπτά, πράγμα που οδηγεί σωστά τους λεκέδες στα κελιά.
- Στη συνέχεια προστίθεται το αποχρωματιστικό διάλυμα (Αυτό αφαιρεί την κόκκινη χρωστική από όλα τα κύτταρα εκτός από τα οξέα βακτήρια).
- Μπλε του μεθυλενίου προστίθεται ως αντικηλίδα (Χρωματίζει όλα τα αποχρωματισμένα βακτηριακά κύτταρα).
- Τα οξέα γρήγορα βακτήρια παραμένουν κόκκινα, ενώ τα μη όξινα γρήγορα βακτήρια χρωματίζονται με μπλε.
Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ Gram Stain και Acid Fast;
- Η χρώση με γραμμάρια και η γρήγορη με οξύ είναι δύο τεχνικές διαφορικής χρώσης.
- Και οι δύο τεχνικές κατηγοριοποιούν τα βακτήρια σε δύο ομάδες.
- Και οι δύο τεχνικές χρησιμοποιούν δύο λεκέδες και έναν αποχρωματισμό.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ Gram Stain και Acid Fast;
Gram Stain vs Acid Fast |
|
| Η χρώση κατά Gram είναι μια τεχνική διαφορικής χρώσης, η οποία διαχωρίζει τα βακτήρια σε δύο ομάδες θετικά κατά Gram και αρνητικά κατά Gram βακτήρια. | Acid Fast Stain είναι μια διαφορική χρώση που χρησιμοποιείται για τον εντοπισμό οργανισμών που είναι ταχύτατοι σε οξύ από οργανισμούς που δεν είναι ταχύτατοι. |
| Πρωτεύουσα χρώση | |
| Η κρυσταλλική βιολέτα είναι η συνήθως χρησιμοποιούμενη κύρια χρώση στη χρώση γραμμαρίων. | Carbol fuchsin είναι η κύρια χρώση που χρησιμοποιείται στο acid fast. |
| Αποχρωματιστικός παράγοντας | |
| Το 95% αλκοόλ χρησιμοποιείται ως αποχρωματιστικός παράγοντας σε λεκέδες σε γραμμάρια. | Η όξινη αλκοόλη χρησιμοποιείται ως αποχρωματιστικός παράγοντας στο acid fast. |
| Counter Stain | |
| Η Γραμμική χρώση χρησιμοποιεί σαφρανίνη ως αντικηλίδα. | Acid fast χρησιμοποιεί το μπλε του μεθυλενίου ως αντίθετο λεκέ. |
| παρατήρηση | |
| Γραμαρνητικά βακτήρια παρατηρούνται στο χρώμα της επιλογής και τα θετικά σε γραμμάρια βακτήρια παρατηρούνται στο μωβ χρώμα. | Τα βακτήρια Acid Fast παρατηρούνται με κόκκινο χρώμα και τα μη οξέα βακτήρια παρατηρούνται με μπλε χρώμα. |
Σύνοψη – Gram Stain vs Acid Fast
Η οπτικοποίηση των μικροοργανισμών σε ζωντανή κατάσταση είναι δύσκολη. Ως εκ τούτου, οι βιολογικοί λεκέδες και οι διαδικασίες χρώσης χρησιμοποιούνται εκτενώς για τη μελέτη των ιδιοτήτων τους. Η διαφορική χρώση είναι ένας τύπος τεχνικής χρώσης που χρησιμοποιείται για τη διαφοροποίηση των βακτηρίων. Η χρώση κατά Gram και η γρήγορη χρώση με οξύ είναι δύο τεχνικές διαφορικής χρώσης. Η χρώση κατά Gram διαφοροποιεί τα αρνητικά κατά gram βακτήρια και τα θετικά κατά gram βακτήρια με βάση το πάχος των κυτταρικών τοιχωμάτων τους. Η γρήγορη χρώση με οξύ διαφοροποιεί τα γρήγορα βακτήρια από τα μη όξινα βακτήρια με βάση την περιεκτικότητα σε μυκολικό οξύ στο κυτταρικό τοίχωμα. Αυτή είναι η διαφορά μεταξύ του acid fast και της χρώσης σε γραμμάρια.
Λήψη έκδοσης PDF του Gram Stain vs Acid Fast
Μπορείτε να κατεβάσετε την έκδοση PDF αυτού του άρθρου και να τη χρησιμοποιήσετε για σκοπούς εκτός σύνδεσης σύμφωνα με τη σημείωση παραπομπής. Κάντε λήψη της έκδοσης PDF εδώ Διαφορά μεταξύ Gram Stain και Acid Fast.
