Βασική διαφορά – Ανοσοφθορισμός έναντι ανοσοϊστοχημείας
Η διάγνωση ασθενειών, η οποία χρησιμοποιεί μοριακές βιολογικές μεθόδους, έχει γίνει ένας αναδυόμενος τομέας της τεχνολογίας κλινικών εργαστηρίων. Περιλαμβάνει όλες τις δοκιμές και τις μεθόδους για τον εντοπισμό μιας ασθένειας και την κατανόηση της αιτίας μιας ασθένειας με ανάλυση DNA, RNA ή εκφραζόμενων πρωτεϊνών σε έναν οργανισμό. Η ραγδαία πρόοδος στη μοριακή διάγνωση επέτρεψε τη βασική έρευνα για μεταδοτικές και μη μεταδοτικές ασθένειες. Αυτά χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό των αλλαγών στην αλληλουχία ή τα επίπεδα έκφρασης σε κρίσιμα γονίδια ή πρωτεΐνες που εμπλέκονται στη νόσο. Ο ανοσοφθορισμός (IF) και η ανοσοϊστοχημεία (IHC) είναι δύο τέτοιες ευρέως χρησιμοποιούμενες τεχνικές στη βιολογία του καρκίνου. Το IF είναι ένας τύπος IHC όπου χρησιμοποιείται μια μέθοδος ανίχνευσης φθορισμού για την ανάλυση μονοκλωνικών και πολυκλωνικών αντισωμάτων, ενώ το IHC χρησιμοποιεί μεθόδους βασισμένες σε χημικές ουσίες για την ανίχνευση των μονοκλωνικών και πολυκλωνικών αντισωμάτων. Αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ IF και IHC.
Τι είναι ο ανοσοφθορισμός (IF);
Ο ανοσοφθορισμός είναι μια τεχνική ανίχνευσης όπου τα αντισώματα που χρησιμοποιούνται στον προσδιορισμό επισημαίνονται χρησιμοποιώντας φθορίζουσες βαφές ή φθορίζουσες πρωτεΐνες για τον σκοπό ανίχνευσης. Τα επισημασμένα δευτερεύοντα αντισώματα μπορούν να οδηγήσουν σε ανεπιθύμητα σήματα υποβάθρου. Επομένως, η τεχνική IF βασίζεται στην επισήμανση του ίδιου του πρωτογενούς αντισώματος προς το παρόν, προκειμένου να αποφευχθούν ανεπιθύμητα σήματα κατά την ανίχνευση. Μέσω αυτής της τεχνικής, αποτρέπεται η μη ειδική δέσμευση μεταξύ του πρωτογενούς και του δευτερογενούς αντισώματος και είναι πιο γρήγορη καθώς δεν εμπλέκεται δευτερεύον στάδιο επώασης. Η ποιότητα των δεδομένων είναι επίσης βελτιωμένη.
Εικόνα 01: Χρώση διπλού ανοσοφθορισμού για BrdU, NeuN και GFAP
Τα φθορόχρωμα ή οι φθορίζουσες βαφές είναι ενώσεις που μπορούν να απορροφήσουν την ακτινοβολία, κατά προτίμηση την υπεριώδη ακτινοβολία που διεγείρεται. Όταν τα σωματίδια φτάσουν στη θεμελιώδη κατάσταση από τη διεγερμένη κατάσταση, εκπέμπουν ακτινοβολία η οποία συλλαμβάνεται και ανιχνεύεται από έναν ανιχνευτή για να σχηματίσει ένα φάσμα. Έχει μεγάλη σημασία η φθορίζουσα ετικέτα να είναι συμβατή και σταθερή για τη συγκεκριμένη αντίδραση και θα πρέπει να είναι σωστά συζευγμένη με το αντίσωμα προκειμένου να ληφθούν ακριβή αποτελέσματα. Ένα από τα πιο χρησιμοποιούμενα φθοροχρωμικά είναι η ισοθειοκυανική φλουορεσκεΐνη (FITC), η οποία είναι πράσινου χρώματος, με μήκη κύματος κορυφής απορρόφησης και εκπομπής 490 nm και 520 nm, αντίστοιχα. Η ροδαμίνη, ένας άλλος παράγοντας που χρησιμοποιείται στο IF, έχει κόκκινο χρώμα και έχει διακριτά μήκη κύματος απορρόφησης και εκπομπής 553 nm και 627 nm.
Τι είναι η ανοσοϊστοχημεία (IHC);
Το IHC είναι μια μέθοδος μοριακής εξέτασης που εφαρμόζεται προκειμένου να εντοπιστεί και να επιβεβαιωθεί η παρουσία του αντιγόνου στο κύτταρο στόχο. Το κύτταρο στόχος μπορεί να είναι ένα μολυσματικό σωματίδιο, ένα μικροβιακό παθογόνο ή ένα κύτταρο κακοήθους όγκου. Το IHC χρησιμοποιεί μονοκλωνικά και πολυκλωνικά αντισώματα για να προσδιορίσει την παρουσία αντιγόνων που υπάρχουν στην κυτταρική επιφάνεια των κυττάρων-στόχων. Η τεχνική βασίζεται στη δέσμευση αντιγόνου-αντισώματος. Ένας δείκτης ανίχνευσης συζευγνύεται με αυτά τα αντισώματα προκειμένου να ανιχνευθεί η παρουσία ή η απουσία του συγκεκριμένου αντιγόνου. Αυτοί οι δείκτες μπορεί να είναι χημικοί δείκτες όπως ένζυμα, αντισώματα με φθορισμό ή αντισώματα με ραδιοσήμανση.
Εικόνα 02: Φέτα εγκεφάλου ποντικού που χρωματίστηκε με ανοσοϊστοχημεία
Η πιο δημοφιλής εφαρμογή του IHC είναι στη βιολογία των καρκινικών κυττάρων για τον εντοπισμό της παρουσίας κακοήθων όγκων, αλλά χρησιμοποιείται επίσης για την ανίχνευση μολυσματικών ασθενειών.
Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ του ανοσοφθορισμού και της ανοσοϊστοχημείας;
- Ο ανοσοφθορισμός και η ανοσοϊστοχημεία λαμβάνουν χώρα υπό συνθήκες in vitro.
- Και οι δύο τεχνικές βασίζονται στο αντιγόνο-αντίσωμα
- Και οι δύο είναι πολύ γρήγορες τεχνικές.
- Τα αποτελέσματα των τεχνικών είναι αναπαραγώγιμα.
- Και τα δύο έχουν βελτιωμένη ποιότητα δεδομένων.
- Αυτές οι τεχνικές χρησιμοποιούνται στη διάγνωση για τον καρκίνο και τις μολυσματικές ασθένειες.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ του ανοσοφθορισμού και της ανοσοϊστοχημείας;
Ανοσοφθορισμός έναντι ανοσοϊστοχημείας |
|
| IF είναι μια τεχνική ανίχνευσης όπου τα αντισώματα που χρησιμοποιούνται στον προσδιορισμό επισημαίνονται χρησιμοποιώντας φθορίζουσες βαφές ή φθορίζουσες πρωτεΐνες για ανίχνευση. | Το IHC είναι μια τεχνική ανίχνευσης όπου τα αντισώματα που χρησιμοποιούνται στον προσδιορισμό επισημαίνονται με χρήση χημικών ή ραδιενεργών στοιχείων για ανίχνευση. |
| Ακρίβεια | |
| Η ακρίβεια είναι υψηλότερη στην τεχνική IF σε σύγκριση με την IHC. | Η ακρίβεια είναι χαμηλότερη στο IHC. |
| Ειδικότητα | |
| IF είναι πιο συγκεκριμένο. | Το IHC είναι λιγότερο συγκεκριμένο. |
Σύνοψη – Ανοσοφθορισμός έναντι ανοσοϊστοχημείας
Οι μοριακοί μηχανισμοί έχουν επιφέρει πολλές αλλαγές στον τομέα της ιατρικής, οδηγώντας σε προηγμένες μεθόδους μοριακών δοκιμών που έχουν επιφέρει επαναστάσεις στον τομέα της διάγνωσης. Αυτές οι εφευρέσεις οδήγησαν σε ταχεία και ακριβή αναγνώριση και επιβεβαίωση της νόσου, επιτρέποντας έτσι την επιτυχή χορήγηση και παραγωγή φαρμάκων. Αυτές οι τεχνικές χρησιμοποιούνται επίσης στη φαρμακολογία προκειμένου να βρεθούν οι στόχοι των φαρμάκων και να επιβεβαιωθούν οι φαρμακοκινητικές ιδιότητες του φαρμάκου κατά τον μεταβολισμό του φαρμάκου. Το IF και το IHC είναι δύο διαγνωστικές μέθοδοι που βασίζονται στην έννοια της δέσμευσης αντιγόνου και αντισωμάτων, αν και ο τρόπος ανίχνευσης και στις δύο τεχνικές διαφέρει. Το IF χρησιμοποιεί την αρχή του φθορισμού για την ανίχνευση του αντιγόνου και το IHC χρησιμοποιεί την έννοια της χημικής σύζευξης για την ανίχνευση του αντιγόνου. Αυτή είναι η διαφορά μεταξύ IF και IHC.
Λήψη έκδοσης PDF του Immunofluorescence vs Immunohistochemistry
Μπορείτε να κατεβάσετε την έκδοση PDF αυτού του άρθρου και να τη χρησιμοποιήσετε για σκοπούς εκτός σύνδεσης σύμφωνα με τη σημείωση παραπομπής. Κάντε λήψη της έκδοσης PDF εδώ Διαφορά μεταξύ ανοσοφθορισμού και ανοσοϊστοχημείας.
