Η βασική διαφορά μεταξύ ανταγωνιστικής και μη ανταγωνιστικής ELISA είναι ότι η ανταγωνιστική ELISA χρησιμοποιεί ένα αντιγόνο αναστολής ενώ η μη ανταγωνιστική ELISA δεν χρησιμοποιεί αντιγόνο αναστολής για τον προσδιορισμό.
Η Ανοσοροφητική Δοκιμασία Συνδεδεμένη με Ένζυμο (ELISA) είναι μια ανοσολογική ανάλυση που ανιχνεύει διάφορους στόχους όπως αντισώματα, αντιγόνα, πρωτεΐνες και γλυκοπρωτεΐνες. Είναι μια γρήγορη και απλή μέθοδος εκτέλεσης. Ως εκ τούτου, χρησιμοποιείται συχνότερα για ερευνητικούς και διαγνωστικούς σκοπούς. Η ELISA περιλαμβάνει τη χρήση ενζύμων και την ειδική δέσμευση αντισώματος και αντιγόνου. Με βάση τον τρόπο με τον οποίο συμβαίνουν οι αντιδράσεις, υπάρχουν τέσσερις τύποι ELISA: άμεση ELISA, έμμεση ELISA, ELISA σάντουιτς και ELISA αναστολής. Η άμεση, η έμμεση και η ELISA τύπου σάντουιτς είναι τύποι μη ανταγωνιστικής ELISA ενώ η ELISA αναστολής είναι ένας τύπος πλήρους ELISA. Ο κύριος στόχος αυτού του άρθρου είναι να συζητήσει τη διαφορά μεταξύ ανταγωνιστικής και μη ανταγωνιστικής ELISA.
Τι είναι η ανταγωνιστική ELISA;
Competitive ELISA μετρά τη συγκέντρωση αντιγόνου σε ένα δείγμα μέσω της ανίχνευσης παρεμβολής σήματος. Εδώ, η ανάλυση χρησιμοποιεί ένα αντιγόνο αναστολέα. Ως εκ τούτου, είναι ένας τύπος ELISA αναστολής. Κατά τη διάρκεια αυτής της διαδικασίας, τα αντιγόνα που υπάρχουν στο δείγμα ανταγωνίζονται το επιλεγμένο αντιγόνο αναφοράς για δέσμευση σε μια συγκεκριμένη ποσότητα επισημασμένου αντισώματος. Επιπλέον, αυτή η διαδικασία ξεκινά με την επώαση του δείγματος, με την περίσσεια ποσότητας επισημασμένου αντισώματος. Επίσης, το αντιγόνο αναφοράς θα πρέπει να είναι προεπικαλυμμένο σε μια πλάκα ανάλυσης πολλαπλών φρεατίων. Στη συνέχεια, το μίγμα του δείγματος θα πρέπει να προστεθεί στην πλάκα ανάλυσης που περιέχει το αντιγόνο αναφοράς. Τα ελεύθερα αντισώματα θα συνδεθούν με το αντιγόνο αναφοράς ανάλογα με την ποσότητα του αντιγόνου στο δείγμα. Ως εκ τούτου, εάν υπάρχει περισσότερο δείγμα αντιγόνου, θα ανιχνευθεί λιγότερο αντιγόνο αναφοράς. Έτσι, δημιουργεί ένα ασθενέστερο σήμα.
Εικόνα 01: ELISA
Αντίθετα, όταν το δείγμα περιέχει λιγότερη ποσότητα αντιγόνου, όλο και περισσότερο αντιγόνο αναφοράς θα καταλάβει τα αντισώματα και θα δώσει ένα ισχυρό σήμα. Εφόσον η ανταγωνιστική ELISA δίνει ισχυρότερο σήμα όταν το δείγμα περιέχει χαμηλή ποσότητα αντιγόνων, η ανταγωνιστική ELISA είναι μια πολύ ευαίσθητη ανάλυση, ακόμη και για δείγματα με μικρό αριθμό αντιγόνων.
Σε ορισμένα ανταγωνιστικά κιτ ELISA, χρησιμοποιείται ένα επισημασμένο αντιγόνο αντί για ένα επισημασμένο αντίσωμα. Εδώ, το επισημασμένο αντιγόνο και το αντιγόνο δείγματος θα ανταγωνίζονται για τη σύνδεση με το πρωτεύον αντίσωμα. Ομοίως, όταν η ποσότητα του αντιγόνου στο δείγμα είναι χαμηλή, η ποσότητα του επισημασμένου αντιγόνου που συνδέεται με τα αντισώματα θα είναι μεγαλύτερη και θα δημιουργεί ισχυρότερο σήμα.
Τι είναι η μη ανταγωνιστική ELISA;
Μεταξύ των τεσσάρων τύπων ELISA, τρεις τύποι είναι μη ανταγωνιστικοί ELISA. Είναι η άμεση ELISA, η έμμεση ELISA και η ELISA σάντουιτς. Και οι τρεις μορφές λειτουργούν σύμφωνα με την κοινή αρχή της ELISA με μικρές διαφορές στις μεθοδολογίες τους.
Η άμεση ELISA χρησιμοποιεί ένα πρωτεύον αντίσωμα σημασμένο με ένζυμο. Ως εκ τούτου, δεν απαιτεί δευτερεύον αντίσωμα. Επομένως, η άμεση ELISA είναι ταχύτερη από άλλους τύπους ELISA. Το πρωτεύον αντίσωμα θα συνδεθεί απευθείας με το ακινητοποιημένο αντιγόνο στόχο που υπάρχει στην πλάκα. Ως εκ τούτου, η αντίδραση ενζύμου-υποστρώματος θα λάβει χώρα, παράγοντας ένα ορατό σήμα.
Εικόνα 02: Σάντουιτς ELISA
Σε αντίθεση με την άμεση ELISA, η έμμεση ELISA χρησιμοποιεί ένα μη επισημασμένο πρωτογενές αντίσωμα και ένα δευτερεύον αντίσωμα σημασμένο με ένζυμο. Μόλις το πρωτογενές αντίσωμα συνδεθεί με το ακινητοποιημένο αντιγόνο, το δευτερεύον αντίσωμα δεσμεύεται στο πρωτεύον αντίσωμα. Το ένζυμο στο δευτερεύον αντίσωμα θα αντιδράσει με το αντιγόνο και θα παράγει ένα ορατό σήμα. Η ELISA σάντουιτς διαφέρει τόσο από την άμεση όσο και από την έμμεση ELISA. Εδώ, το αντίσωμα ακινητοποιείται στο τοίχωμα της πλάκας ανάλυσης.
Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ ανταγωνιστικής και μη ανταγωνιστικής ELISA;
- Η ανταγωνιστική και η μη ανταγωνιστική ELISA είναι δύο τύποι τεχνικών ανοσοπροσροφητικής ανάλυσης.
- Είναι πολύ ευέλικτες και ευαίσθητες τεχνικές.
- Επιπλέον, τόσο η ανταγωνιστική όσο και η μη ανταγωνιστική ELISA είναι ανοσοπροσδιορισμοί συνδεδεμένοι με ένζυμα.
- Επίσης, και οι δύο μέθοδοι παράγουν ένα σήμα λόγω μιας αντίδρασης ενζύμου-υποστρώματος.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ ανταγωνιστικής και μη ανταγωνιστικής ELISA;
Η ανταγωνιστική ELISA είναι ένας τύπος ELISA που βασίζεται στην ολοκλήρωση μεταξύ αντιγόνου αναλυόμενης ουσίας και σημασμένου αντιγόνου για περιορισμένη ποσότητα ειδικού αντισώματος. Από την άλλη πλευρά, δεν υπάρχει τέτοιος ανταγωνισμός μεταξύ αντιγόνου ενδιαφέροντος και αντιγόνου αναφοράς σε μη ανταγωνιστική ELISA. Έτσι, αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ ανταγωνιστικής και μη ανταγωνιστικής ELISA. Ομοίως, η ανταγωνιστική ELISA είναι ELISA αναστολής ενώ η μη ανταγωνιστική ELISA δεν είναι ELISA αναστολής. Επομένως, αυτή είναι επίσης μια διαφορά μεταξύ ανταγωνιστικής και μη ανταγωνιστικής ELISA.
Επιπλέον, η ανταγωνιστική ELISA είναι πιο κατάλληλη για τη μέτρηση χαμηλής ποσότητας αντιγόνου ενδιαφέροντος. Είναι μια ευαίσθητη μέθοδος. Από την άλλη πλευρά, η μη ανταγωνιστική ELISA δεν εξαρτάται από τον αριθμό των αντιγόνων που υπάρχουν σε ένα δείγμα. Επομένως, αυτή είναι επίσης μια διαφορά μεταξύ ανταγωνιστικής και μη ανταγωνιστικής ELISA.
Το παρακάτω infographic εξηγεί τη διαφορά μεταξύ ανταγωνιστικής και μη ανταγωνιστικής ELISA συγκριτικά.
Σύνοψη – Ανταγωνιστικό vs Μη ανταγωνιστικό ELISA
Η ανταγωνιστική και η μη ανταγωνιστική ELISA είναι οι δύο κύριοι τύποι ELISA ή ανοσοπροσροφητικών δοκιμών συνδεδεμένων με ένζυμα. Συνοψίζοντας τη διαφορά μεταξύ ανταγωνιστικής και μη ανταγωνιστικής ELISA, η ανταγωνιστική ELISA βασίζεται στον ανταγωνισμό μεταξύ αντιγόνου ενδιαφέροντος και αντιγόνου αναφοράς προς την περιορισμένη ποσότητα αντισωμάτων. Επομένως, η ανταγωνιστική ELISA ονομάζεται επίσης ELISA αναστολής. Από την άλλη πλευρά, η μη ανταγωνιστική ELISA δεν βασίζεται στον ανταγωνισμό μεταξύ των αντιγόνων-στόχων και των αντιγόνων αναφοράς. Χρησιμοποιεί περίσσεια επισημασμένου ειδικού αντισώματος προς την αναλυόμενη ουσία που μας ενδιαφέρει. Έτσι, αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ ανταγωνιστικής και μη ανταγωνιστικής ELISA. Η άμεση ELISA, η έμμεση ELISA και η ELISA σάντουιτς είναι οι τρεις κύριοι τύποι μη ανταγωνιστικής ELISA.
