Η βασική διαφορά μεταξύ Elisa και Elispot είναι ότι το Elisa είναι μια συνδεδεμένη με ένζυμα ανοσοπροσροφητική ανάλυση που καθορίζει τη συνολική συγκέντρωση των εκκρινόμενων πρωτεϊνών σηματοδότησης, ενώ το Elispot είναι μια ενζυμική ανοσοπροσροφητική ανάλυση που ανιχνεύει μεμονωμένα κύτταρα που εκκρίνουν κυτοκίνη..
Το Elisa και το Elispot είναι δύο συνδεδεμένες με ένζυμα ανοσοπροσροφητικές δοκιμασίες που χρησιμοποιούνται ευρέως στην ιατρική, την παθολογία των φυτών, τη βιοτεχνολογία και διάφορες φαρμακευτικές βιομηχανίες. Σε αυτές τις τεχνικές, ένας αναλύτης πρωτεΐνης ανιχνεύεται από ένα αντίσωμα που στρέφεται εναντίον του. Το Elisa είναι η πιο δημοφιλής ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία που χρησιμοποιείται σε εργαστήρια. Από την άλλη πλευρά, το Elispot είναι ένας ανοσοπροσροφητικός προσδιορισμός συνδεδεμένος με ένζυμα που δεν χρησιμοποιείται αντί του Elisa αλλά χρησιμοποιείται επιπλέον του Elisa σε εργαστήρια.
Τι είναι η ανάλυση Elisa;
Το Elisa είναι μια ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία που προσδιορίζει τη συνολική συγκέντρωση των εκκρινόμενων πρωτεϊνών σηματοδότησης. Είναι ένας ευρέως χρησιμοποιούμενος αναλυτικός προσδιορισμός βιοχημείας που περιγράφηκε για πρώτη φορά από τους Engvall και Perlmann το 1971. Αυτή η τεχνική χρησιμοποιεί έναν τύπο ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας στερεάς φάσης για την ανίχνευση της παρουσίας μιας συγκεκριμένης πρωτεΐνης σε ένα υγρό δείγμα χρησιμοποιώντας αντισώματα που στρέφονται εναντίον αυτής της συγκεκριμένης πρωτεΐνης. Αυτή η ανάλυση είναι ένα ευρέως χρησιμοποιούμενο διαγνωστικό εργαλείο στην ιατρική, την παθολογία των φυτών και τη βιοτεχνολογία.
Μηχανισμός της δοκιμής ELISA
Στο μεγαλύτερο μέρος της δοκιμής ELISA, μια άγνωστη ποσότητα αντιγόνου ακινητοποιείται σε ένα στερεό υπόστρωμα (πλάκα μικρολίτρων) στην αρχή. Στη συνέχεια, το αντίστοιχο πρωτεύον αντίσωμα εφαρμόζεται πάνω από την επιφάνεια στερεού στηρίγματος. Αυτό το αντίσωμα σχηματίζει ένα σύμπλεγμα με το αντιγόνο (σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος). Το πρωτογενές αντίσωμα που είναι συνδεδεμένο με αντιγόνο μπορεί να ανιχνευθεί από ένα δευτερεύον αντίσωμα που συνδέεται με ένα ένζυμο μέσω βιοσύζευξης. Στο τελικό στάδιο της δοκιμής Elisa, προστίθεται μια ουσία που περιέχει το υπόστρωμα του ενζύμου. Εάν υπάρχει σωστή σύνδεση ενός πρωτογενούς αντισώματος στο αντιγόνο, δημιουργείται μια ανιχνεύσιμη αλλαγή χρώματος από το υπόστρωμα. Τελικά, αυτό ποσοτικοποιεί το αντιγόνο στο δείγμα.
Εικόνα 01: Διαφορετικοί τύποι Elisa
Επιπλέον, υπάρχουν διαφορετικές προσεγγίσεις για την Elisa, όπως η άμεση Elisa και η έμμεση Elisa. Επί του παρόντος, χρησιμοποιούνται διάφορα τεστ Elisa για την ανίχνευση ανθρώπινων παθογόνων όπως Mycobacterium tuberculosis, ροταϊός, ιός ηπατίτιδας Β, ιός ηπατίτιδας C, E.coli που παράγει εντεροτοξίνη, HIV και SARS-CoV-2.
Τι είναι η ανάλυση Elispot;
Το Elispot είναι μια ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία που ανιχνεύει μεμονωμένα κύτταρα που εκκρίνουν κυτοκίνη. Ο Cecil Czerkinsky περιέγραψε για πρώτη φορά το ELISpot το 1983. Είναι ένας τύπος προσδιορισμού που εστιάζει στην ποσοτική μέτρηση της συχνότητας έκκρισης κυτοκίνης για ένα μόνο κύτταρο. Ταξινομείται επίσης ως τεχνική που χρησιμοποιεί αντισώματα για την ανίχνευση βιολογικού ή χημικού αναλύτη πρωτεΐνης. Η δοκιμασία Fluorospot είναι μια παραλλαγή της ανάλυσης Elispot, η οποία χρησιμοποιεί φθορισμό για την ανάλυση πολλαπλών αναλυτών (πιο μυστικές πρωτεΐνες).
Μηχανισμός δοκιμής Elispot
Σε αυτόν τον μηχανισμό, προστίθενται αρχικά μονοκλωνικά αντισώματα ειδικά για κυτοκίνη στα φρεάτια των πλακών μικρολίτρων. Στη συνέχεια τα επιθυμητά κύτταρα που παρατηρούνται προστίθενται στα φρεάτια. Αργότερα, τα κύτταρα επωάζονται. Κατά τη διάρκεια της κυτταρικής επώασης, τα κύτταρα αφήνονται να αντιδράσουν σε οποιοδήποτε ερέθισμα και να εκκρίνουν κυτοκίνη. Οι κυτοκίνες που έχουν εκκριθεί από τα επωασμένα κύτταρα θα προσκολληθούν στα αντισώματα αφού τα κύτταρα περιβάλλονται από μονοκλωνικά αντισώματα ειδικά για τις κυτοκίνη.
Εικόνα 02: Δοκιμασία Elispot
Για να ανιχνευθούν αυτά τα ειδικά για κυτοκίνη μονοκλωνικά αντισώματα, βιοτινυλιωμένα ειδικά αντισώματα ανίχνευσης προστίθενται στο φρεάτιο. Βιοτινυλιωμένα ειδικά αντισώματα ανίχνευσης συλλαμβάνουν τα ειδικά για κυτοκίνη μονοκλωνικά αντισώματα στα φρεάτια. Επιπλέον, συζεύγματα στρεπταβιδίνης-ενζύμου προστίθενται στα φρεάτια προκειμένου να συνδεθούν με τα αντισώματα ανίχνευσης. Στο τελικό στάδιο, προστίθενται συγκεκριμένα υποστρώματα στα φρεάτια. Οι αντιδράσεις των συζυγών ενζύμων και των υποστρωμάτων δημιουργούν διακριτές κηλίδες στα φρεάτια. Αυτά τα διακριτά σημεία διαβάζονται σε έναν αυτοματοποιημένο αναγνώστη ELISpot. Τελικά, αυτό θα υπολογίσει περαιτέρω τη συχνότητα έκκρισης κυτοκίνης.
Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ της Elisa και της Elispot;
- Είναι και οι δύο συνδεδεμένες με ένζυμα ανοσοπροσροφητικές δοκιμές.
- Και οι δύο δοκιμές ανιχνεύουν ειδικούς αναλυτές πρωτεΐνης.
- Αυτές οι δοκιμές χρησιμοποιούν ειδικά αντισώματα για τον εντοπισμό των αναλυτών πρωτεΐνης.
- Και οι δύο δοκιμές χρησιμοποιούν ένζυμα και υποστρώματα.
- Χρησιμοποιούνται ως διαγνωστικό εργαλείο σε ιατρικά εργαστήρια.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ Elisa και Elispot;
Το Elisa είναι μια ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία που προσδιορίζει τη συνολική συγκέντρωση των εκκρινόμενων πρωτεϊνών σηματοδότησης. Από την άλλη πλευρά, το Elispot είναι μια συνδεδεμένη με ένζυμα ανοσοπροσροφητική δοκιμασία που μετρά μεμονωμένα κύτταρα που εκκρίνουν κυτοκίνη. Έτσι, αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ της Elisa και του Elispot. Επιπλέον, στη δοκιμή Elisa, το αντιγόνο ακινητοποιείται πρώτα στα φρεάτια μικρολίτρων. Αντίθετα, στη δοκιμή Elispot, το αντίσωμα ακινητοποιείται πρώτα στα φρεάτια μικρολίτρων. Επομένως, αυτή είναι μια άλλη διαφορά μεταξύ της Elisa και της Elispot.
Το παρακάτω infographic παρουσιάζει μια λεπτομερή ανάλυση της διαφοράς μεταξύ Elisa και Elispot σε μορφή πίνακα.
Σύνοψη – Elisa vs Elispot
Το Elisa και το Elispot είναι δύο συνδεδεμένες με ένζυμα ανοσοπροσροφητικές δοκιμασίες που χρησιμοποιούνται ευρέως στην ιατρική, την παθολογία των φυτών, τη βιοτεχνολογία και διαφορετικές φαρμακευτικές βιομηχανίες. Το Elisa ανιχνεύει την παρουσία ενός συνδέτη (πρωτεΐνη) σε ένα υγρό δείγμα χρησιμοποιώντας αντισώματα που στρέφονται εναντίον του συνδέτη που πρόκειται να μετρηθεί. Η ανάλυση Elispot είναι μια ευρέως χρησιμοποιούμενη μέθοδος για την παρακολούθηση των ανοσολογικών αποκρίσεων. Ανιχνεύει μεμονωμένα κύτταρα που εκκρίνουν κυτοκίνη χρησιμοποιώντας αντισώματα. Είναι τόσο μια τεχνική ανοσοδοκιμασίας όσο και βιοδοκιμασίας. Έτσι, αυτή είναι η περίληψη της διαφοράς μεταξύ Elisa και Elispot.
