Η βασική διαφορά μεταξύ ραδιοανοσοδοκιμασίας και ανοσοραδιομετρικής ανάλυσης είναι ότι στη ραδιοανοσοδοκιμασία, το δείγμα ή η ένωση που θα μετρηθεί συνδυάζεται με ένα ραδιενεργό αντιγόνο πριν από το συνδυασμό, ενώ στην ανοσοραδιομετρική ανάλυση, το δείγμα ή η ένωση συνδυάζεται αμέσως με το ραδιοσημασμένο αντισώματα.
Μια ανοσοδοκιμασία είναι μια βιοχημική εξέταση που ανιχνεύει την παρουσία ή τη συγκέντρωση μακρομορίων σε ένα διάλυμα χρησιμοποιώντας ένα αντίσωμα ή αντιγόνο. Φθορίζοντα και ραδιενεργά αντισώματα χρησιμοποιούνται για τη μέτρηση των αντιγόνων σε ένα δείγμα. Αρχικά, τα αντισώματα χρησιμοποιήθηκαν σε τεχνικές καθίζησης όπως η ανοσοκατακρήμνιση, η ανοσοδιάχυση και η ανοσοηλεκτροφόρηση για την ανάλυση πρωτεϊνών ορού. Επί του παρόντος, χρησιμοποιούνται πολύ ευαίσθητες τεχνικές, όπως η ραδιοανοσοδοκιμασία και οι ανοσοραδιομετρικές δοκιμασίες για τη μέτρηση φαρμάκων, δεικτών όγκου και ορμονών.
Τι είναι η Ραδιοανοσοδοκιμασία;
Η Radioimmunoassay (RIA) είναι μια ανοσοδοκιμασία που χρησιμοποιεί ραδιενεργά στοιχεία σταδιακό σχηματισμό συμπλεγμάτων αντιγόνου-αντισώματος. Η RIA χρησιμοποιεί συνήθως ραδιενεργά αντισώματα για να ανιχνεύσει την ποσότητα του αντιγόνου σε ένα δείγμα. Η RIA είναι μια πολύ ειδική και εξαιρετικά ευαίσθητη in vitro δοκιμασία. Η αρχή πίσω από την RIA είναι ανταγωνιστική δεσμευτική. Εδώ, ένα ραδιενεργό αντιγόνο ανταγωνίζεται ένα μη ραδιενεργό αντιγόνο για μια σταθερή ποσότητα θέσεων δέσμευσης αντισώματος ή υποδοχέα. Η RIA απαιτεί ειδικές άδειες και προφυλάξεις, καθώς χρησιμοποιούνται ραδιενεργές ουσίες και παραμένει μεταξύ των φθηνότερων τεχνικών.
Εικόνα 01: Ανοσοπροσδιορισμός
Κατά τη διάρκεια της RIA, μια γνωστή ποσότητα αντιγόνου καθίσταται ραδιενεργό συχνά επισημαίνοντάς το με γάμμα-ραδιενεργά ισότοπα ιωδίου που συνδέονται με την τυροσίνη. Στη συνέχεια, αυτό το αντιγόνο συνδυάζεται με μια γνωστή ποσότητα αντισώματος. Εδώ, τόσο το αντιγόνο όσο και το αντίσωμα συνδέονται ειδικά μεταξύ τους. Στη συνέχεια, προστίθεται ένα δείγμα ορού αίματος για να ξεκινήσει μια ανταγωνιστική αντίδραση μεταξύ των επισημασμένων αντιγόνων και των μη επισημασμένων αντιγόνων στον ορό με ειδικά αντισώματα. Σε αυτή την αντίδραση, τα αντισώματα απελευθερώνουν μια ορισμένη ποσότητα επισημασμένου αντιγόνου. Αυτή η ποσότητα είναι ανάλογη με την αναλογία σημασμένου προς μη επισημασμένο αντιγόνο. Τέλος, δημιουργείται μια καμπύλη δέσμευσης για την εξαγωγή της ποσότητας αντιγόνου στον ορό αίματος ενός ασθενούς.
Τι είναι η ανοσοραδιομετρική ανάλυση;
Η Ανοσοραδιομετρική ανάλυση (IRMA) είναι μια ανοσοδοκιμασία που χρησιμοποιεί ραδιοσημασμένα αντισώματα. Στο IRMA, τα αντισώματα επισημαίνονται χρησιμοποιώντας ραδιοϊσότοπα. Αυτά τα αντισώματα συνδέονται με τα αντιγόνα που υπάρχουν σε ένα συγκεκριμένο δείγμα. Σε ένα θετικό δείγμα, αντισώματα που είναι ραδιενεργά επισημασμένα συνδέονται με τους ελεύθερους επίτοπους των αντιγόνων. Αυτό σχηματίζει ένα σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος.
Κατά τη δεύτερη αντίδραση, τα επισημασμένα αντισώματα που δεν είναι δεσμευμένα απομακρύνονται χρησιμοποιώντας ένα αντιγόνο στερεάς φάσης. Ο υπόλοιπος αριθμός ραδιενεργών αντισωμάτων στο διάλυμα είναι άμεση συνάρτηση της συγκέντρωσης του αντιγόνου. Το IRMA είναι γνωστό ως προσδιορισμός περίσσειας αντιδραστηρίου όπου χρησιμοποιείται περίσσεια ποσότητα ραδιοσημασμένου αντισώματος ως αντιδραστήριο. Εδώ, μια περίσσεια συγκέντρωσης επισημασμένου αντισώματος ή αντιγόνου αφήνεται να αντιδράσει. Ως τελικό στάδιο, τα δεσμευμένα σε αντιγόνο και τα ελεύθερα αντισώματα διαχωρίζονται και το κλάσμα που συνδέεται με το αντιγόνο υποβάλλεται σε ραδιενεργούς προσδιορισμούς. Εδώ, η δραστηριότητα του κλάσματος είναι ευθέως ανάλογη με τη συγκέντρωση του αντιγόνου.
Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ της ραδιοανοσοδοκιμασίας και της ανοσοραδιομετρικής ανάλυσης;
- Τόσο η ραδιοανοσοδοκιμασία όσο και η ανοσοραδιομετρική ανάλυση είναι ανοσοπροσδιορισμοί που χρησιμοποιούν ραδιενεργά στοιχεία στον σταδιακό σχηματισμό συμπλεγμάτων αντιγόνου-αντισώματος.
- Σχηματίζουν ένα σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ της ραδιοανοσοδοκιμασίας και της ανοσοραδιομετρικής ανάλυσης;
Η Ραδιοανοσοδοκιμασία είναι μια ανοσοδοκιμασία που προσδιορίζει τα επίπεδα αντισωμάτων με ένα αντιγόνο σημασμένο με ραδιοϊσότοπο, ενώ η ανοσοραδιομετρική ανάλυση είναι μια ανάλυση περίσσειας αντιδραστηρίου που χρησιμοποιεί περίσσεια συγκέντρωσης ραδιοσημασμένου αντισώματος. Έτσι, αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ της ραδιοανοσοδοκιμασίας και της ανοσοραδιομετρικής ανάλυσης. Το IRMA είναι ικανό να παρέχει υψηλότερη ευαισθησία από το RIA. Στο RIA, τα αντιγόνα επισημαίνονται με γάμμα-ραδιενεργά ισότοπα ιωδίου, ενώ στα αντισώματα IRMA, επισημαίνονται χρησιμοποιώντας ισότοπα ιωδίου. Έτσι, αυτή είναι επίσης μια διαφορά μεταξύ της ραδιοανοσοδοκιμασίας και της ανοσοραδιομετρικής ανάλυσης. Δεδομένου ότι το IRMA είναι μια τεχνική περίσσειας αντιδραστηρίου, η ανάλυση εκτελείται σε συντομότερο χρόνο από το RIA.
Ο παρακάτω πίνακας συνοψίζει τις διαφορές μεταξύ της ραδιοανοσοδοκιμασίας και της ανοσοραδιομετρικής ανάλυσης.
Σύνοψη – Ραδιοανοσοδοκιμασία vs Ανοσοραδιομετρική ανάλυση
Η Radioimmunoassay είναι μια ανοσοδοκιμασία που χρησιμοποιεί ραδιενεργά στοιχεία σε σταδιακό σχηματισμό για τον προσδιορισμό των επιπέδων αντισωμάτων. Η RIA χρησιμοποιεί συνήθως ραδιενεργά αντισώματα. Ένα ραδιενεργό αντιγόνο ανταγωνίζεται ένα μη ραδιενεργό αντιγόνο για μια σταθερή ποσότητα αντισώματος ή θέσεων δέσμευσης υποδοχέα. Η ανοσοραδιομετρική δοκιμασία είναι μια ανοσοδοκιμασία που πραγματοποιείται για τον προσδιορισμό των επιπέδων αντιγόνου ενός δείγματος χρησιμοποιώντας ραδιοσημασμένα αντισώματα. Αυτά τα αντισώματα συνδέονται με αντιγόνα που υπάρχουν σε ένα συγκεκριμένο δείγμα. Στο τέλος κάθε προσδιορισμού, σχηματίζεται ένα σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος. Για να ληφθούν τα αποτελέσματα των δοκιμασιών, σχεδιάζεται μια καμπύλη δέσμευσης. Στη ραδιοανοσοδοκιμασία, η επισημασμένη ποσότητα αντιγόνου είναι ανάλογη με την αναλογία σημασμένου προς μη επισημασμένο αντιγόνο, αλλά σε έναν ανοσοραδιομετρικό προσδιορισμό, η δραστηριότητα του δεσμευμένου με αντιγόνο κλάσματος είναι ευθέως ανάλογη με τη συγκέντρωση του αντιγόνου. Αυτή είναι η περίληψη της διαφοράς μεταξύ της ραδιοανοσοδοκιμασίας και της ανοσοραδιομετρικής ανάλυσης.
