Η βασική διαφορά μεταξύ της χρωματομετρικής και της φθοριομετρικής ανάλυσης είναι ότι η χρωματομετρική ανάλυση καθορίζει τη συγκέντρωση των έγχρωμων ενώσεων σε ένα διάλυμα ενώ η φθοριομετρική ανάλυση καθορίζει τον κινητικό μηχανισμό ενός διαλύματος.
Μια βιοχημική δοκιμασία είναι μια τεχνική που ανιχνεύει ή ποσοτικοποιεί τη δραστηριότητα ενός βιολογικού μορίου ή ουσίας αναλυτικά. Είναι μια in vitro διαδικασία. Η χρωματομετρική και η φθοριομετρική δοκιμασία είναι δύο τύποι κοινών βιοχημικών δοκιμασιών που πραγματοποιούνται σε εργαστήρια. Πολλαπλές τεχνικές όπως το ELISA και το western blotting είναι επίσης πολύπλοκες βιοχημικές δοκιμασίες για τον ποσοτικό προσδιορισμό της μεταβολικής δραστηριότητας και τη μέτρηση της λειτουργικής συμπεριφοράς βιομορίων όπως πρωτεΐνες, ένζυμα και άλλα μικρά μόρια. Αυτοί οι τύποι αναλύσεων χρησιμοποιούνται για την ταυτοποίηση των αλληλεπιδράσεων πρωτεΐνης-DNA, πρωτεΐνης-RNA και πρωτεΐνης-πρωτεΐνης.
Τι είναι η χρωματομετρική ανάλυση;
Η χρωματομετρική ανάλυση είναι μια τεχνική που προσδιορίζει τη συγκέντρωση έγχρωμων ενώσεων σε ένα διάλυμα. Με άλλα λόγια, ο χρωματομετρικός προσδιορισμός είναι μια αντίδραση που οδηγεί σε αλλαγή χρώματος λόγω ενζυματικής ή χημικής αντίδρασης μεταξύ αντιδραστηρίων και αναλυτών. Οι χρωματομετρικές δοκιμασίες εφαρμόζονται στη βιοχημεία για τον έλεγχο ενζύμων, ειδικών ενώσεων, ορμονών, αντισωμάτων και άλλων αναλυτών. Χρησιμοποιούν χρωματόμετρα ή φασματοφωτόμετρα. Τα χρωματόμετρα είναι όργανα που χαρακτηρίζουν τα έγχρωμα δείγματα προκειμένου να παρέχουν ένα αντικειμενικό μέτρο των χαρακτηριστικών χρώματος. Το φασματοφωτόμετρο είναι μια συσκευή που μετρά την ένταση του φωτός σε συνάρτηση με το χρώμα ή το μήκος κύματος του φωτός.
Εικόνα 01: Χρωματομετρικός προσδιορισμός
Πώς λειτουργεί μια χρωματομετρική ανάλυση;
Σε μια χρωματομετρική ανάλυση, παρασκευάζεται ένα τρυβλίο με ένα συγκεκριμένο αντίσωμα συνδεδεμένο σε φρεάτια. Στη συνέχεια προστίθεται το δείγμα. Αυτό μπορεί να επιτρέψει στο δείγμα να συνδεθεί με το αντίσωμα. Στη συνέχεια, ένα αντίσωμα ανίχνευσης και ένα υπόστρωμα προστίθενται στα φρεάτια για να αντιδράσουν με τον ανιχνευτή ανίχνευσης. Το διάλυμα διακοπής προστίθεται στο τέλος πριν από την ανάγνωση. Ένα κενό φρεάτιο που ονομάζεται κενό μένει χωρίς το δείγμα. Στη χρωματομετρική ανάλυση, όσο πιο σκούρο είναι το χρώμα, τόσο μεγαλύτερη είναι η συγκέντρωση της αναλυόμενης ουσίας. Συνήθως, χρειάζεται μόνο ένα μήκος κύματος για να γίνει η ανάγνωση. Αλλά εάν υπάρχει μέτρηση αναφοράς, χρησιμοποιούνται δύο ή περισσότερα μήκη κύματος.
Τι είναι η Φθοριομετρική Ανάλυση;
Η φθοριομετρική δοκιμασία είναι μια τεχνική που προσδιορίζει τον κινητικό μηχανισμό των ενζυμικών αντιδράσεων. Μια φθορομετρική δοκιμασία λαμβάνει χώρα με σχηματισμό ενός φθορίζοντος προϊόντος από ένα μη φθορίζον υπόστρωμα ή αντίστροφα. Αυτή η ανάλυση χρησιμοποιεί επίσης τη μεταφορά ενέργειας συντονισμού φθορισμού (FRET) όπου η ενζυματική αντίδραση αλλάζει τη θέση δύο φθοροφόρων στο υπόστρωμα, μεταβάλλοντας έτσι την ένταση φθορισμού.
Εικόνα 02: Φθοριομετρικός προσδιορισμός
Οι φθορομετρικές δοκιμασίες είναι γενικά πολύ πιο ευαίσθητες από άλλες δοκιμασίες. Οι διαγνωστικές εκτιμήσεις ενζύμων σε δείγματα ιστών, κυττάρων ή υγρών ασθενών αυξάνονται λόγω της υψηλότερης ευαισθησίας τους.
Πώς λειτουργεί μια φθοριομετρική ανάλυση;
Σε μια φθοριομετρική δοκιμασία, ένα υπόστρωμα προστίθεται στο δείγμα της πλάκας και η απόκριση φθορισμού λαμβάνεται χρησιμοποιώντας τη συσκευή ανάγνωσης πλακών. Εδώ, κάθε κελί μετράται ξεχωριστά. Οι αδιαφανείς πλάκες χρησιμοποιούνται σε φθορομετρικούς προσδιορισμούς. Αυτό μειώνει τη σκέδαση του φωτός. Δύο μήκη κύματος είναι απαραίτητα για αυτόν τον τύπο ανάλυσης. Το ένα μήκος κύματος είναι για την ανίχνευση της διέγερσης και το άλλο μήκος κύματος είναι για την εκπομπή.
Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ της χρωματομετρικής και της φθορομετρικής ανάλυσης;
- Χρωματομετρικός προσδιορισμός και φθοριομετρικός προσδιορισμός είναι δύο τύποι βιοχημικών αναλύσεων.
- Και οι δύο αναλύσεις πραγματοποιούνται για ιατρικές διαγνώσεις.
- Αυτές οι δοκιμασίες περιλαμβάνουν μια ενζυματική αντίδραση.
- Και οι δύο δοκιμασίες περιλαμβάνουν υπόστρωμα και αναλυτές.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ της χρωματομετρικής και της φθοριομετρικής ανάλυσης;
Η χρωματομετρική δοκιμασία είναι μια τεχνική που προσδιορίζει τη συγκέντρωση έγχρωμων ενώσεων σε ένα διάλυμα, ενώ η φθοριομετρική ανάλυση είναι μια τεχνική που προσδιορίζει τον κινητικό μηχανισμό των ενζυμικών αντιδράσεων. Έτσι, αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ της χρωματομετρικής και της φθοριομετρικής ανάλυσης. Επιπλέον, οι φθοριομετρικές δοκιμασίες είναι πιο ευαίσθητες από τις χρωματομετρικές δοκιμασίες. Έτσι, οι φθορομετρικές δοκιμασίες έχουν την ικανότητα να ανιχνεύουν περισσότερες αναλυόμενες ουσίες. Έτσι, αυτή είναι μια άλλη σημαντική διαφορά μεταξύ της χρωματομετρικής και της φθοριομετρικής δοκιμασίας. Επιπλέον, οι φθοριομετρικές δοκιμασίες απαιτούν δύο μήκη κύματος, ενώ οι χρωματομετρικές αναλύσεις πραγματοποιούνται με ένα μήκος κύματος.
Το παρακάτω infographic παρουσιάζει περισσότερες διαφορές μεταξύ της χρωματομετρικής και της φθοριομετρικής ανάλυσης.
Σύνοψη – Χρωματομετρική vs Φθοριομετρική ανάλυση
Μια βιοχημική δοκιμασία είναι μια αναλυτική διαδικασία που χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό και την ποσοτικοποίηση των κυτταρικών μεταβολικών αντιδράσεων. Η χρωματομετρική δοκιμασία και η φθοριομετρική δοκιμασία είναι δύο τύποι βιοχημικών δοκιμασιών. Ο χρωματομετρικός προσδιορισμός είναι μια αντίδραση που οδηγεί σε αλλαγή χρώματος λόγω ενζυματικής ή χημικής αντίδρασης μεταξύ αντιδραστηρίων και αναλυτών, ενώ η φθοριομετρική ανάλυση είναι μια τεχνική που χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό του κινητικού μηχανισμού των ενζυμικών αντιδράσεων. Και οι δύο δοκιμασίες εξαρτώνται από μια ενζυματική αντίδραση που περιλαμβάνει ένα υπόστρωμα και έναν αναλύτη. Οι φθορομετρικές δοκιμασίες είναι πιο ευαίσθητες από τις χρωματομετρικές δοκιμασίες. Το πιο σημαντικό, οι φθορομετρικές δοκιμασίες απαιτούν δύο μήκη κύματος, ενώ οι χρωματομετρικές δοκιμασίες μπορούν να πραγματοποιηθούν μόνο με ένα μήκος κύματος. Έτσι, αυτό συνοψίζει τη διαφορά μεταξύ χρωματομετρικής και φθοριομετρικής ανάλυσης.
