Βασική διαφορά – Phusion εναντίον Taq Polymerase
Οι Οι πολυμεράσες DNA είναι ένζυμα που χρησιμοποιούνται ευρέως σε τεχνικές μοριακής βιολογίας και υπάρχουν επίσης φυσικά σε όλους τους οργανισμούς που υφίστανται αντιγραφή DNA. Είναι τα βασικά ένζυμα πολυμερισμού που εμπλέκονται κατά την αντιγραφή. Η DNA πολυμεράση είναι ικανή να προσθέτει νουκλεοτίδια στο ελεύθερο άκρο 3' του κλώνου DNA προκαλώντας έτσι την επέκταση ενός νέου κλώνου. Επί του παρόντος, λόγω των εξελίξεων της μοριακής βιολογίας στη διάγνωση ασθενειών και στις βιομηχανικές εφαρμογές, είναι σημαντικό να παρασκευάζονται πολυμεράσες με διάφορες ευεργετικές ιδιότητες. Αυτό αυξάνει την ακρίβεια της μεθόδου και την καθιστά πιο γρήγορη τεχνική. Η πολυμεράση Phusion και Taq είναι δύο θερμοσταθερά ένζυμα πολυμεράσης που παράγονται στο εμπόριο και χρησιμοποιούνται σε ειδικές μοριακές εφαρμογές. Το Phusion είναι μια πολυμεράση DNA που απομονώθηκε από Pyrococcus furiosus και χρησιμοποιείται κυρίως σε πειράματα κλωνοποίησης για την αύξηση της πιστότητας. Η Taq DNA Polymerase είναι η τυπική πολυμεράση DNA που χρησιμοποιείται στην Αλυσιδωτή Αντίδραση Πολυμεράσης (PCR) και απομονώνεται από το θερμοσταθερό βακτήριο. Thermus aquaticus. Η βασική διαφορά μεταξύ των δύο ενζύμων είναι ο μικροοργανισμός πηγής. Το Phusion απομονώνεται από το ακραίο, Pyrococcus furiosus, ενώ η πολυμεράση Taq απομονώνεται από το θερμόφιλο, Thermus aquaticus.
Τι είναι το Phusion;
Η
Η πολυμεράση του Phusion DNA είναι μια νέα πολυμεράση που παράγεται με την απομόνωση του ενζύμου από τον Pyrococcus furiosus, ο οποίος είναι μια ακραία φιλική Archaea. Αυτά τα μικρόβια κατοικούν σε συνθήκες εξαιρετικά υψηλής θερμοκρασίας, καθιστώντας έτσι την πολυμεράση μια πολυμεράση εξαιρετικά σταθερή στη θερμότητα. Η πολυμεράση Phusion χρησιμοποιείται για την επίτευξη εξαιρετικής πιστότητας έναντι της συμβατικής θερμοσταθερής πολυμεράσης. Taq πολυμεράση. Η πολυμεράση Phusion είναι ικανή να ενισχύει μακριές μήτρες έως 7,5 kb γονιδιωματικού DNA. Η βέλτιστη ικανότητα πολυμερισμού της πολυμεράσης Phusion είναι στους 720 C. Το Phusion χρησιμοποιείται επίσης σε προϊόντα κλωνοποίησης για αλληλούχιση, ανάλυση έκφρασης και ανάλυση μεταλλάξεων.
Η Phusion DNA πολυμεράση έχει τη δράση εξωνουκλεάσης 3' – 5'. Αυτό επιτρέπει τη διόρθωση της νέας σύνθεσης κλώνου μετά τη σύνθεση. Ως εκ τούτου, οι αναντιστοιχίες νουκλεοτιδίων επιδιορθώνονται εύκολα. Έτσι, έχει μικρότερο ποσοστό σφάλματος. Τα συνολικά πλεονεκτήματα της πολυμεράσης Phusion είναι:
- Extreme Fidelity
- Υψηλή ταχύτητα και μειωμένος χρόνος παράτασης
- Ισχυρές αντιδράσεις και απαιτεί ελάχιστη βελτιστοποίηση
- Υψηλή απόδοση
Εικόνα 01: Phusion
Το κύριο μειονέκτημα της πολυμεράσης Phusion είναι ότι αναστέλλεται παρουσία τριφωσφορικής δεοξυουριδίνης (dUTP). Όταν τα dUTPs συσσωρεύονται στο μίγμα της αντίδρασης, μπορεί να αναστείλει τις δράσεις της πολυμεράσης Phusion. Αυτό αποτρέπεται με επεξεργασία του μίγματος της αντίδρασης με dUTPase πριν από την προσθήκη του ενζύμου. Προς το παρόν, μια ανθεκτική σε dUTP παραλλαγή της πολυμεράσης Phusion γνωστή ως Pfu Turbo χρησιμοποιείται αντί της πολυμεράσης Phusion ως θεραπεία σε αυτό το πρόβλημα.
Τι είναι η πολυμεράση Taq;
Η εφεύρεση της πολυμεράσης DNA Taq έφερε επανάσταση στον τομέα της μοριακής βιολογίας. Έλυσε ένα σημαντικό πρόβλημα στην ενίσχυση του DNA. Η πολυμεράση Taq DNA είναι ένα ένζυμο πολυμεράσης σταθερό στη θερμότητα που εκχυλίζεται και απομονώνεται από το θερμόφιλο βακτήριο Thermus aquaticus. Η ανακάλυψη αυτών των ενζύμων οδηγεί στην ανάπτυξη της PCR. Αυτό το ένζυμο επέτρεψε τη χρήση της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης στην ενίσχυση του DNA αντί για τις συμβατικές επίπονες τεχνικές κλωνοποίησης. Η PCR χρησιμοποιείται πλέον στη μοριακή διάγνωση, στη γεωργία και στη βιομηχανία με πολλές νέες παραλλαγές που προστέθηκαν στην τεχνική.
Εικόνα 02: Taq Polymerase
Η
Taq DNA πολυμεράση λειτουργεί στο βέλτιστο εύρος θερμοκρασίας μεταξύ 720C – 800C. Η πολυμεράση Taq DNA απαιτεί έναν συμπαράγοντα. μαγνήσιο για τη λειτουργία του. Η πολυμεράση Taq δεν έχει την ικανότητα διόρθωσης 3' – 5', επομένως, το ποσοστό σφάλματος της Taq DNA πολυμεράσης είναι υψηλό σε σύγκριση με περισσότερους νεότερους τύπους DNA πολυμεράσης, όπως η πολυμεράση Phusion κ.λπ. Ωστόσο, η δημοτικότητα της πολυμεράσης Taq DNA παραμένει το ίδιο σε όλο τον κόσμο της επιστήμης λόγω της ευκολίας και της ευελιξίας του ενζύμου.
Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ Phusion και Taq πολυμεράσης;
- Τόσο τα ένζυμα πολυμεράσης Phusion όσο και Taq είναι ένζυμα πολυμερισμού που είναι ικανά να προσθέτουν νουκλεοτίδια στο 3' ελεύθερο άκρο του κλώνου DNA.
- Και οι πολυμεράσες Phusion και Taq απαιτούν μια αλληλουχία εκκινητών για την έναρξη του πολυμερισμού.
- Και οι πολυμεράσες Phusion και Taq είναι θερμοσταθερές.
- Και οι πολυμεράσες Phusion και Taq χρησιμοποιούνται σε μηχανισμούς PCR για την ενίσχυση του DNA.
- Όταν προστίθεται η πολυμεράση στο μείγμα αντίδρασης, τόσο οι πολυμεράσες Phusion όσο και οι Taq προστίθενται τελευταία για να διασφαλιστεί η αποτελεσματικότητα του ενζύμου.
- Και οι πολυμεράσες Phusion και Taq συντίθενται στο εμπόριο για πειραματικούς σκοπούς μοριακής βιολογίας.
- Και οι πολυμεράσες Phusion και Taq απαιτούν έναν συμπαράγοντα για να ολοκληρώσουν τη λειτουργία τους.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ Phusion και Taq Polymerase;
Phusion εναντίον Taq Polymerase |
|
| Το Phusion είναι μια πολυμεράση DNA που απομονώθηκε από Pyrococcus furiosus και χρησιμοποιείται κυρίως σε πειράματα κλωνοποίησης για την αύξηση της πιστότητας. | Η Taq DNA Polymerase είναι η τυπική πολυμεράση DNA που χρησιμοποιείται στην αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) και απομονώνεται από το θερμοσταθερό βακτήριο Thermus aquaticus. |
| Πηγή Οργανισμός | |
| Το Phusion εξάγεται από ακραίες αρχαίες - Pyrococcus furiosus. | Αυτά τα λογοτεχνικά έργα εκτείνονται από την περίοδο του αποικισμού έως την περίοδο της αποαποικιοποίησης. |
| Δυνατότητα ανάγνωσης απόδειξης | |
| 3' – 5' ικανότητα απόδειξης ανάγνωσης υπάρχει στο Phusion. | Η ικανότητα ανάγνωσης 3' – 5' απουσιάζει στην πολυμεράση Taq. |
| Πιστότητα | |
| Υψηλή πιστότητα υπάρχει με το Phusion. | Η πολυμεράση Taq δείχνει χαμηλή πιστότητα. |
| Ενίσχυση | |
| Το Phusion είναι ικανό να ενισχύει μακρά θραύσματα DNA. | Η Η πολυμεράση Taq είναι ικανή να ενισχύει πολύ μικρότερα θραύσματα DNA. |
| dUTP Δηλητηρίαση | |
| Η δράση Phusion αναστέλλεται από την περιττή συσσώρευση. | Η πολυμεράση Taq δεν αναστέλλεται από το dUPT. |
Σύνοψη – Phusion εναντίον πολυμεράσης Taq
Η πολυμεράση Phusion και Taq DNA είναι δύο θερμοσταθερές πολυμεράσες που χρησιμοποιούνται σε τεχνικές PCR. Το Phusion είναι μια πολυμεράση που απομονώνεται από το ακραίο, Pyrococcus furiosus, ενώ το Taq απομονώνεται από το θερμοσταθερό βακτήριο Thermus aquaticus. Η ανακάλυψη Taq DNA πολυμεράσης οδηγεί στην εφεύρεση PCR. Το Phusion έχει πολλά πλεονεκτήματα έναντι του Taq, γεγονός που έχει κάνει το Phusion καλύτερη επιλογή για την παραγωγή DNA υψηλής πιστότητας. Ωστόσο, η πολυμεράση Taq εξακολουθεί να χρησιμοποιείται ως το τυπικό ένζυμο πολυμεράσης στην PCR. Αυτή είναι η διαφορά μεταξύ Phusion και Taq πολυμεράσης.
