Βασική διαφορά – HPLC έναντι HPTLC
Η βασική διαφορά μεταξύ HPLC και HPTLC είναι ότι το HPLC επιτρέπει τον ποσοτικό διαχωρισμό των συστατικών σε ένα δείγμα, ενώ το HPTLC δεν επιτρέπει τον ποσοτικό διαχωρισμό των συστατικών σε ένα δείγμα.
Η χρωματογραφία είναι μια μέθοδος φυσικού διαχωρισμού που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό και την αναγνώριση των συστατικών σε ένα μείγμα. Τόσο η HPLC όσο και η HPTLC είναι χρωματογραφικές τεχνικές. Η HPLC είναι υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης. Το HPTLC είναι χρωματογραφία λεπτής στιβάδας υψηλής απόδοσης.
Τι είναι το HPLC;
Η HPLC είναι υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης. Είναι μια αναλυτική τεχνική που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό, την αναγνώριση και την ποσοτικοποίηση των συστατικών σε ένα μείγμα. Σε αυτή την τεχνική, το δείγμα διαλύεται σε κατάλληλο διαλύτη. Στη συνέχεια ο διαλύτης με το δείγμα διέρχεται μέσω αντλίας με δεδομένη πίεση. Η αντλία είναι γεμάτη με στερεό προσροφητικό υλικό. Στη συνέχεια, ορισμένα συστατικά συνδέονται ισχυρά με το απορροφητικό υλικό ενώ άλλα συστατικά συνδέονται χαλαρά. Αυτό κάνει τα εξαρτήματα να έχουν διαφορετικούς ρυθμούς ροής μέσω της αντλίας. Επομένως, τα εξαρτήματα μπορούν να διαχωριστούν εύκολα.
Εικόνα 01: Σύστημα HPLC
Το προσροφητικό υλικό που γεμίζει την αντλία είναι γνωστό ως στατική φάση. Ο διαλύτης με το διαλυμένο δείγμα είναι γνωστός ως κινητή φάση. Η αντλία που χρησιμοποιείται σε αυτή την τεχνική ονομάζεται στήλη. Η στήλη είναι γεμάτη με ένα προσροφητικό υλικό, συνηθέστερα, σωματίδια πυριτίου. Το μέγεθος αυτών των σωματιδίων μπορεί να κυμαίνεται από 2-50 μm. Η διαδικασία διαχωρισμού επηρεάζεται από τη σύνθεση της κινητής φάσης και τη θερμοκρασία του συστήματος. Οι αλληλεπιδράσεις μεταξύ της στατικής φάσης και του συστατικού στο δείγμα μπορεί να είναι υδρόφοβες αλληλεπιδράσεις, αλληλεπιδράσεις διπόλου-διπόλου, ιοντικοί δεσμοί κ.λπ.
Η πίεση λειτουργίας της HPLC είναι σημαντικά υψηλότερη από αυτή της παραδοσιακής υγρής χρωματογραφίας. Βρίσκεται γύρω στα 50-350 bar. Η διαφορά μεταξύ υγρής χρωματογραφίας και HPLC είναι ότι στην υγρή χρωματογραφία, το δείγμα πέφτει μέσω της στήλης υπό τη βαρύτητα ενώ, στην HPLC, το δείγμα υπόκειται σε πίεση μέσω της στήλης. Το μέγεθος της στήλης και τα απορροφητικά σωματίδια είναι επίσης πολύ μικρά σε σύγκριση με την παραδοσιακή υγρή χρωματογραφία. Ωστόσο, η ανάλυση που δίνεται από την τεχνική HPLC είναι ανώτερη.
Τι είναι το HPTLC;
Το HPTLC είναι χρωματογραφία λεπτής στιβάδας υψηλής απόδοσης. Είναι η προηγμένη και αυτοματοποιημένη μορφή του παραδοσιακού TLC. Αυτή η τεχνική παρέχει αποτελεσματική ανάλυση σε σύντομο χρονικό διάστημα. Σε αυτή τη μέθοδο ανάλυσης, το δείγμα και μια αναφορά μπορούν να αναλυθούν ταυτόχρονα, γεγονός που επιτρέπει τη σύγκριση του δείγματος με την αναφορά. Παρέχει βελτιωμένη αναλυτική ακρίβεια από άλλες χρωματογραφικές τεχνικές. Ο χρόνος που απαιτείται για την ανάλυση είναι μικρότερος. Η τεχνική είναι μια τεχνική χαμηλού κόστους.
Εικόνα 02: Ανάλυση χρωστικών τροφίμων με χρήση HPTLC
Η μέθοδος HPTLC είναι μια απλή διαδικασία και το στάδιο προετοιμασίας του δείγματος εξαλείφεται επίσης (Στην παραδοσιακή TLC, το στάδιο προετοιμασίας του δείγματος περιλαμβάνεται πριν από τον διαχωρισμό. Αυτό το βήμα περιλαμβάνει καθαρισμό και εμπλουτισμό). Ο διαλύτης μπορεί να χρησιμοποιηθεί απευθείας χωρίς καμία προεπεξεργασία, αν και άλλες χρωματογραφικές τεχνικές απαιτούν προεπεξεργασίες όπως απαέρωση, διήθηση κ.λπ.
Το προσροφητικό υλικό που χρησιμοποιείται στο HPTLC είναι πυρίτιο με πολύ μικρά μεγέθη σωματιδίων. Στην παραδοσιακή TLC, το μέγεθος σωματιδίων του πυριτίου είναι 5-20 μm ενώ, στην HPTLC, είναι 4-8 μm. Το δείγμα εφαρμόζεται στην πλάκα HPTLC χρησιμοποιώντας έναν εφαρμοστή. Δίνει ομοιόμορφη και ασφαλή εφαρμογή. Στη συνέχεια οι πλάκες τοποθετούνται σε θάλαμο που έχει την κινητή φάση. Ο θάλαμος πρέπει να είναι κορεσμένος με τον ατμό της κινητής φάσης. Μετά τη διαδικασία HPTLC, τα σημεία που έχουν μετακινηθεί μπορούν να ανιχνευθούν. Κατά την ανίχνευση των κηλίδων στο πιάτο, η τεχνική HPTLC χρησιμοποιεί μια κατάλληλη περιοχή UV ή έναν θάλαμο ιωδίου.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ HPLC και HPTLC;
HPLC vs HPTLC |
|
| Η HPLC είναι υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης. | HPTLC είναι υψηλής απόδοσης χρωματογραφία λεπτής στιβάδας. |
| Τεχνική | |
| Σε HPLC, η κινητή φάση με τον διαλύτη διέρχεται από μια στήλη γεμάτη με τη στατική φάση. | Σε HPTLC, το δείγμα εντοπίζεται σε μια πλάκα TLC και τοποθετείται μέσα σε ένα θάλαμο που περιέχει την κινητή φάση. τότε το δείγμα αφήνεται να μετακινηθεί προς τα πάνω στην πλάκα μαζί με την κινητή φάση. |
| Μέτρηση | |
| Σε HPLC, οι διαφορές μεταξύ των ρυθμών ροής των συστατικών μέσω της στήλης χρησιμοποιούνται για τον διαχωρισμό των στοιχείων στο δείγμα. | Στο HPTLC, οι διαφορές μεταξύ των αποστάσεων που διανύθηκαν από κάθε στοιχείο στο δείγμα χρησιμοποιούνται για τον διαχωρισμό των στοιχείων στο δείγμα. |
| Ποσοτικός διαχωρισμός | |
| Το HPLC επιτρέπει τον ποσοτικό διαχωρισμό των συστατικών σε ένα δείγμα. | HPTLC δεν επιτρέπει ποσοτικό διαχωρισμό των συστατικών σε ένα δείγμα. |
Σύνοψη – HPLC vs HPTLC
HPLC και HPTLC είναι δύο χρωματογραφικές τεχνικές. Η βασική διαφορά μεταξύ HPLC και HPTLC είναι ότι το HPLC επιτρέπει τον ποσοτικό διαχωρισμό των συστατικών σε ένα δείγμα, ενώ το HPTLC δεν επιτρέπει τον ποσοτικό διαχωρισμό των συστατικών σε ένα δείγμα.
