Η βασική διαφορά μεταξύ HPLC αντίστροφης φάσης και κανονικής φάσης είναι ότι η HPLC αντίστροφης φάσης χρησιμοποιεί μια μη πολική στατική φάση και μια πολική κινητή φάση, ενώ η κανονική φάση HPLC χρησιμοποιεί μια πολική στατική φάση και μια λιγότερο πολική κινητή φάση.
Η HPLC κανονικής φάσης είναι η παλαιότερη τεχνική HPLC που χρησιμοποίησε ο Tswett στους διαχωρισμούς των φυτικών εκχυλισμάτων. χρησιμοποίησε κιμωλία σε γυάλινη στήλη. Αυτός ήταν ο κλασικός τρόπος χρωματογραφίας που οδήγησε στην ονομασία του ως «κανονική» τεχνική. Η HPLC αντίστροφης φάσης, από την άλλη πλευρά, είναι το αντίθετο από την κανονική τεχνική, την οποία ανέπτυξαν οι επιστήμονες πρόσφατα.
Τι είναι η HPLC ανάστροφης φάσης;
Η HPLC αντίστροφης φάσης είναι μια χρωματογραφική τεχνική στην οποία χρησιμοποιούμε μια υδρόφοβη στατική φάση. Μεταξύ όλων των μεθόδων HPLC, χρησιμοποιούμε αυτή τη μέθοδο για περίπου 70% λόγω της ευρείας εφαρμογής και της αναπαραγωγιμότητάς της. Η στατική φάση είναι μη πολική και η κινητή φάση είναι πολική.
Τις περισσότερες φορές, οι επιστήμονες χρησιμοποιούν ως κινητή φάση ένα υδατικό μείγμα νερού με έναν αναμίξιμο, πολικό οργανικό διαλύτη, όπως ακετονιτρίλιο ή μεθανόλη. Επομένως, οι αναλυόμενες ουσίες αλληλεπιδρούν με τη μη πολική στατική φάση.
Τι είναι η HPLC κανονικής φάσης;
Η HPLC κανονικής φάσης είναι μια χρωματογραφική τεχνική στην οποία χρησιμοποιούμε μια υδρόφιλη στατική φάση. Είναι η παραδοσιακή μέθοδος HPLC, αν και δεν τη χρησιμοποιούμε τόσο πολύ. Η στατική φάση είναι πολική και η κινητή φάση είναι μη πολική. Το πιο σημαντικό, η κινητή φάση αυτής της τεχνικής είναι 100% οργανική. Αυτό σημαίνει ότι δεν χρησιμοποιείται νερό για αυτό.
Εικόνα 01: Ένα προφίλ δείγματος για χρωματογραφήματα HPLC κανονικής φάσης και αντίστροφης φάσης σύμφωνα με την πολικότητα των συστατικών στην αναλυόμενη ουσία.
Συνήθως, η στατική φάση περιέχει πυρίτιο, κυανό, διόλη, φάσεις με αμινοδεσμούς, κ.λπ. Οι κινητές φάσεις περιλαμβάνουν οργανικούς διαλύτες όπως εξάνιο, οξικό αιθυλεστέρα κ.λπ. Αυτή η τεχνική βασίζεται στην κατακράτηση μορίων διαλύτη ή αναλυόμενης ουσίας στο πολική στατική φάση.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ ανάστροφης φάσης και κανονικής φάσης HPLC;
Η HPLC αντίστροφης φάσης είναι μια χρωματογραφική τεχνική στην οποία χρησιμοποιούμε μια υδρόφοβη στατική φάση. Η στατική φάση αυτής της τεχνικής είναι μη πολική ενώ η κινητή φάση είναι πολική. Επιπλέον, οι επιστήμονες χρησιμοποιούν ένα υδατικό μείγμα νερού με έναν αναμίξιμο, πολικό οργανικό διαλύτη, όπως ακετονιτρίλιο ή μεθανόλη ως κινητή φάση σε HPLC αντίστροφης φάσης. Αντίθετα, η HPLC κανονικής φάσης είναι μια χρωματογραφική τεχνική στην οποία χρησιμοποιούμε μια υδρόφιλη στατική φάση. Η στατική φάση αυτής της τεχνικής είναι πολική ενώ η κινητή φάση είναι μη πολική. Επιπλέον, οι επιστήμονες χρησιμοποιούν οργανικούς διαλύτες όπως εξάνιο, οξικό αιθυλεστέρα κ.λπ. ως την κινητή φάση της HPLC κανονικής φάσης. Το παρακάτω infographic παρουσιάζει τη διαφορά μεταξύ HPLC αντίστροφης φάσης και κανονικής φάσης σε μορφή πίνακα.
Σύνοψη – Αντίστροφη φάση έναντι κανονικής φάσης HPLC
Οι τεχνικές HPLC αντίστροφης φάσης και κανονικής φάσης είναι δύο τεχνικές υγρής χρωματογραφίας. Η βασική διαφορά μεταξύ HPLC αντίστροφης φάσης και κανονικής φάσης είναι ότι η HPLC αντίστροφης φάσης χρησιμοποιεί μια μη πολική στατική φάση και μια πολική κινητή φάση, ενώ η κανονική φάση HPLC χρησιμοποιεί μια πολική στατική φάση και μια λιγότερο πολική κινητή φάση.
