Βασική διαφορά – RNASE A έναντι RNASE H
Οι ριβονουκλεάσες είναι νουκλεάσες που αποικοδομούν ειδικά το RNA σε μικρότερες μονάδες. Μπορούν να χωριστούν σε δύο κατηγορίες. ενδοριβονουκλεάσες και εξοριβονουκλεάσες. Η ενδοριβονουκλεάση είναι μια ενδονουκλεάση που μπορεί να αποικοδομήσει είτε μονόκλωνο είτε δίκλωνο RNA. Διασπά τους φωσφοδιεστερικούς δεσμούς μέσα σε μια πολυνουκλεοτιδική αλυσίδα RNA. Τα παραδείγματα είναι RNase A, RNase III, RNase T1, RNase P και RNase H. Η Exoribonuclease είναι μια εξωνουκλεάση που αποικοδομεί το RNA αφαιρώντας τερματικά νουκλεοτίδια είτε από το 5' άκρο ή το 3' άκρο του μορίου RNA. Τα παραδείγματα είναι RNase R, RNase II, RNase D και RNase PH. Η βασική διαφορά μεταξύ RNASE A και RNASE H είναι ότι η RNase A είναι μια παγκρεατική ριβονουκλεάση που αποικοδομεί ειδικά το μονόκλωνο RNA σε μικρότερα συστατικά ενώ η RNase H είναι ένα μη ειδικό ένζυμο που διασπά το RNA στο υβρίδιο RNA-DNA σε μικρότερες μονάδες μέσω ο υδρολυτικός μηχανισμός.
Τι είναι το RNASE A;
Η RNase A είναι μια παγκρεατική ριβονουκλεάση που διασπά ειδικά τα ασύζευκτα υπολείμματα κυτοσίνης και ουρακίλης στο 3' άκρο του μονόκλωνου RNA. Η RNase H λειτουργεί σε υψηλότερη συγκέντρωση άλατος (0,3M ή υψηλότερη συγκέντρωση NaCl). Η υδρολυτική αντίδραση είναι δύο στάδια. Σχηματίζει ένα 3' φωσφορυλιωμένο προϊόν μέσω 2', 3' κυκλικού μονοφωσφορικού ενδιάμεσου. Αν και είναι ειδικό για μονόκλωνο RNA σε υψηλότερη συγκέντρωση άλατος, μπορεί επίσης να αποικοδομήσει δίκλωνο RNA και RNA σε υβρίδιο RNA-DNA σε χαμηλότερη συγκέντρωση NaCl (χαμηλότερη από 0,3M NaCl).
Ο Bruce Merrifield συνέθεσε για πρώτη φορά αυτό το ένζυμο. Η RNase A είναι ένα πολύ δημοφιλές ένζυμο στη μοριακή έρευνα. Η βόεια παγκρεατική RNase A είναι ένα παράδειγμα RNase A. Και είναι ένα από τα πιο ανθεκτικά ένζυμα που χρησιμοποιούνται στο εργαστήριο. Αυτό το ένζυμο δεν χρειάζεται συμπαράγοντα για τη δραστηριότητά του. Είναι ένα ένζυμο υψηλής θερμοσταθερότητας. Η RNase A είναι το πρώτο ένζυμο και η τρίτη πρωτεΐνη στην οποία ανιχνεύθηκε μια σωστή αλληλουχία αμινοξέων. Αυτό το ένζυμο είναι πολύ μικρό με 124 αμινοξέα και μοριακή μάζα 12600da. Και έχει τέσσερα υπολείμματα ιστιδίνης (His 12 και His 119 που εμπλέκονται στην καταλυτική αντίδραση).
Εικόνα 01: Η RNase A
Η RNase A μπορεί να απομονωθεί με βρασμό ενός ακατέργαστου δείγματος. Όταν βράζει, όλα τα άλλα ένζυμα αποικοδομούν την εναπομείνασα RNase A. Η RNase A είναι ένα εκπληκτικά σταθερό ένζυμο. Αυτό το ένζυμο αναστέλλει με σύμπλοκα πρωτεΐνης αναστολέα ριβονουκλεάσης, βαρέων μετάλλων και βαναδικής ουριδίνης.
Τι είναι η RNase H;
Η RNase H είναι ένα μη ειδικό ένζυμο ριβονουκλεάσης που μπορεί να αποικοδομήσει το RNA σε υβρίδιο RNA-DNA μέσω υδρολυτικής αντίδρασης. Η RNase H διασπά τον δεσμό 3'- O-P του RNA σε ένα υβρίδιο RNA-DNA. Τελικά παράγει 3'OH και 5' φωσφορικά τερματικά προϊόντα. Στην αντιγραφή του DNA παίζει κεντρικό ρόλο αφαιρώντας τον εκκινητή RNA μετά το σχηματισμό νέων κλώνων DNA. Σε εργαστηριακές συνθήκες, αποικοδομεί ειδικά το RNA σε υβρίδιο RNA-DNA αλλά όχι DNA και μη υβριδισμένο RNA. Και αυτό το ένζυμο χρησιμοποιείται συνήθως για την καταστροφή του εκμαγείου RNA μετά τον σχηματισμό του πρώτου συμπληρωματικού κλώνου DNA κατά τη σύνθεση του cDNA.
Εικόνα 02: RNase H
Η RNase H χρησιμοποιείται επίσης σε προσδιορισμούς προστασίας νουκλεάσης. Μπορεί επίσης να ενσωματωθεί στην αφαίρεση της ουράς πολυ Α από το mRNA. Η RNase H έχει την ικανότητα να καταστρέφει το μη κωδικοποιητικό RNA εντός και εκτός του κυττάρου. Τα μεταλλικά ιόντα απαιτούνται ως συμπαράγοντες για αυτήν την πρωτεϊνική δραστηριότητα. Ένας χηλικός παράγοντας (EDTA) μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την αναστολή του ενζύμου RNase H.
Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ RNASE A και RNASE H;
- Και τα δύο είναι από τη φύση τους πρωτεΐνη.
- Και τα δύο είναι ενδοριβονουκλεάση
- Και τα δύο μπορούν να αποικοδομήσουν το RNA.
- Και τα δύο εκτελούν υδρολυτικές αντιδράσεις.
- Τα μοριακά εργαστήρια χρησιμοποιούν και τα δύο.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ RNASE A και RNASE H;
RNASE A vs RNASE H |
|
| Η RNase A είναι μια παγκρεατική ριβονουκλεάση που διασπά ειδικά το 3' άκρο των μη ζευγαρωμένων υπολειμμάτων κυτοσίνης και ουρακίλης του μονόκλωνου RNA σε υψηλότερη συγκέντρωση άλατος. | Η RNase H είναι ένα μη ειδικό ένζυμο ριβονουκλεάσης που μπορεί να αποικοδομήσει το RNA σε υβρίδιο RNA-DNA μέσω υδρολυτικής αντίδρασης. |
| Φύση διάσπασης RNA | |
| Η RNase A διασπά ειδικά το μονόκλωνο RNA σε υψηλότερη συγκέντρωση άλατος. | RNase H διασπά RNA σε υβρίδιο RNA-DNA. |
| Ανάγκη συν-παραγόντων για δραστηριότητα | |
| Η RNase A δεν χρειάζεται συμπαράγοντες για τη δραστηριότητά της. | Η RNase H χρειάζεται μεταλλικά ιόντα ως συμπαράγοντες για τη δραστηριότητά της. |
| Αναστολείς της πρωτεϊνικής δραστηριότητας | |
| Σύμπλοκα πρωτεΐνης αναστολέα ριβονουκλεάσης, βαρέων μετάλλων και βαναδικής ουριδίνης αναστέλλουν τη δραστηριότητα της RNAse A. | Ένας χηλικός παράγοντας (EDTA) αναστέλλει τη δραστηριότητα RNase H. |
| Αφαίρεση εκκινητών RNA στην αντιγραφή DNA | |
| Η RNase A δεν χρησιμοποιείται για την αφαίρεση εκκινητών RNA στην αντιγραφή DNA. | Η RNase H χρησιμοποιείται για την αφαίρεση εκκινητών RNA στην αντιγραφή DNA |
| Αφαίρεση προτύπου DNA στη σύνθεση συμπληρωματικού DNA (C-DNA) | |
| Η RNase A δεν χρησιμοποιείται για την αφαίρεση μήτρας RNA κατά τη σύνθεση συμπληρωματικού DNA (C-DNA). | Η RNase H χρησιμοποιείται για την αφαίρεση μήτρας RNA κατά τη διάρκεια της σύνθεσης συμπληρωματικού DNA (C-DNA). |
| Αφαίρεση Poly-A-Tail σε mRNA υβριδοποιημένο σε ολίγο (dt) | |
| Η RNase A δεν χρησιμοποιείται για την αφαίρεση της «ουράς poly-A» σε mRNA που υβριδοποιείται σε ολιγονουκλεοτίδιο (dt). | Η RNase H χρησιμοποιείται για την αφαίρεση της «ουράς πολυ-Α» σε mRNA υβριδοποιημένο σε ολιγονουκλεοτίδιο (dt) |
Σύνοψη – RNASE A vs RNASE H
Οι ριβονουκλεάσες είναι ένζυμα νουκλεάσης που έχουν την ικανότητα να διασπούν το RNA σε μικρότερες μονάδες. Είναι δύο τύποι? ενδοριβονουκλεάσες και εξοριβονουκλεάσες. Η ενδονουκλεάση είναι μια ενδονουκλεάση που έχει την ικανότητα να αποικοδομεί μονόκλωνο ή δίκλωνο RNA. Και διασπά τον φωσφοδιεστερικό δεσμό μέσα σε μια πολυνουκλεοτιδική αλυσίδα RNA. Η RNase A και η RNase H είναι δύο ενδοριβονουκλεάσες. Η RNase A είναι μια παγκρεατική ριβονουκλεάση που διασπά ειδικά ασύζευκτα υπολείμματα κυτοσίνης και ουρακίλης στο 3' άκρο του μονόκλωνου RNA σε υψηλότερη συγκέντρωση άλατος. Η RNase H είναι ένα μη ειδικό ένζυμο ριβονουκλεάσης που μπορεί να αποικοδομήσει το RNA σε υβρίδιο RNA-DNA μέσω υδρολυτικής αντίδρασης. Αυτή είναι η διαφορά μεταξύ RNase A και RNase H.
Λήψη του PDF RNASE A εναντίον RNASE H
Μπορείτε να κατεβάσετε την έκδοση PDF αυτού του άρθρου και να τη χρησιμοποιήσετε για σκοπούς εκτός σύνδεσης σύμφωνα με τη σημείωση παραπομπής. Κάντε λήψη της έκδοσης PDF εδώ Διαφορά μεταξύ RNASE A και RNASE H
