Η βασική διαφορά μεταξύ RP HPLC και HIC είναι ότι η RP HPLC χρησιμοποιεί μια πιο πολική κινητή φάση και μια λιγότερο πολική στατική φάση. Ενώ, το HIC χρησιμοποιεί μια υδρόφοβη στατική φάση που επιτρέπει στα υδρόφοβα μόρια να προσκολληθούν σε αυτό.
Η χρωματογραφία είναι μια αναλυτική τεχνική που βοηθά στον διαχωρισμό ενός μείγματος στα συστατικά του. Αρχικά, πρέπει να διαλύσουμε το δείγμα που θα διαχωριστεί σε διάλυμα. Αυτό το μείγμα διαλύματος-ουσιών ονομάζεται κινητή φάση. Στη συνέχεια η κινητή φάση διέρχεται από ένα άλλο υλικό που ονομάζεται στατική φάση. Η στατική φάση καθορίζει τον διαχωρισμό των συστατικών. Ο διαχωρισμός συμβαίνει λόγω του διαχωρισμού του υλικού μεταξύ της κινητής φάσης και της στατικής φάσης.
Τι είναι το RP HPLC;
Ο όρος RP HPLC σημαίνει Υγρή Χρωματογραφία Αντίστροφης Φάσης Υψηλής Απόδοσης. Περιλαμβάνει το διαχωρισμό των συστατικών σε ένα μείγμα, σύμφωνα με την υδροφοβικότητα. Τα υδρόφοβα συστατικά στην κινητή φάση συνδέονται με τους ακινητοποιημένους υδρόφοβους συνδετήρες στη στατική φάση, ενώ τα υδρόφιλα συστατικά εκλούονται μέσω της στατικής φάσης χωρίς να προσκολλώνται στην επιφάνεια της στατικής φάσης.
Εικόνα 01: Συσκευή HPLC
Επιπλέον, αυτή η μέθοδος έχει μεγαλύτερη αναπαραγωγιμότητα σε σύγκριση με άλλες χρωματογραφικές τεχνικές και παρουσιάζει επίσης ευρεία εφαρμογή. Επομένως, χρησιμοποιούμε αυτή τη μέθοδο σε εργαστήρια για πάνω από το 75% όλων των μεθόδων HPLC. Τις περισσότερες φορές, χρησιμοποιούμε ένα υδατικό μείγμα νερού με έναν αναμίξιμο πολικό οργανικό διαλύτη ως κινητή φάση. Έτσι, θα εξασφαλίσει την προσκόλληση των υδρόφοβων συστατικών του διαλύματος στην επιφάνεια της στατικής φάσης.
Τι είναι το HIC;
Ο όρος HIC σημαίνει Υδροφοβική Χρωματογραφία Αλληλεπίδρασης. Είναι ένας τύπος HPLC αντίστροφης φάσης και αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται κυρίως για τον διαχωρισμό μεγάλων βιομορίων όπως οι πρωτεΐνες. Σε αυτή τη μέθοδο, πρέπει να χρησιμοποιήσουμε ένα υδατικό μέσο για να φτιάξουμε το δείγμα του βιομορίου. Είναι επειδή οι οργανικοί διαλύτες μπορούν να προκαλέσουν μετουσίωση των πρωτεϊνών. Επιπλέον, αυτή η τεχνική χρησιμοποιεί την αλληλεπίδραση μεταξύ μεγάλων μορίων με μια ελαφρώς υδρόφοβη επιφάνεια της στατικής φάσης. Επιπλέον, πρέπει να χρησιμοποιήσουμε υψηλή συγκέντρωση αλατιού στο δείγμα επειδή ενθαρρύνει τη διατήρηση της πρωτεΐνης στη συσκευασία. αυτή η διαδικασία ονομάζεται αλάτισμα. Μειώνοντας σταδιακά τη συγκέντρωση αλατιού, μπορούμε να κάνουμε τα βιομόρια να εκλούονται ξεχωριστά ανάλογα με την υδροφοβικότητά τους.
Συνήθως, αυτή η μέθοδος χρησιμοποιεί τις συνθήκες αντίθετες από αυτές της ιοντοανταλλακτικής χρωματογραφίας. Σε αυτή την τεχνική, πρώτα, πρέπει να περάσουμε ένα ρυθμιστικό διάλυμα μέσα από τη στήλη προκειμένου να μειωθεί η διαλυτοποίηση της διαλυμένης ουσίας στο δείγμα. Κάνει τις υδρόφοβες περιοχές της πρωτεΐνης να εκτεθούν. Ωστόσο, όταν το μόριο είναι πιο υδρόφοβο, απαιτείται λιγότερο αλάτι για την προώθηση της δέσμευσης. Εδώ, οι λιγότερο υδρόφοβες διαλυμένες ουσίες εκλούονται πρώτα, και σύμφωνα με την αλλαγή στη συγκέντρωση του αλατιού, οι περισσότερες υδρόφοβες διαλυμένες ουσίες εκλούονται τελευταίες.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ RP HPLC και HIC;
Η χρωματογραφία είναι μια αναλυτική τεχνική για τον διαχωρισμό των συστατικών σε ένα μείγμα. Η RP HPLC και η HIC είναι δύο εξειδικευμένες χρωματογραφικές τεχνικές. Η βασική διαφορά μεταξύ RP HPLC και HIC είναι ότι το RP HPLC χρησιμοποιεί μια πιο πολική κινητή φάση και λιγότερο πολική στατική φάση, ενώ η HIC χρησιμοποιεί μια υδρόφοβη στατική φάση, η οποία επιτρέπει στα υδρόφοβα μόρια να προσκολληθούν σε αυτήν.
Το παρακάτω infographic συνοψίζει τη διαφορά μεταξύ RP HPLC και HIC.
Σύνοψη – RP HPLC έναντι HIC
Η χρωματογραφία είναι μια αναλυτική τεχνική για τον διαχωρισμό των συστατικών σε ένα μείγμα. Η RP HPLC και η HIC είναι δύο εξειδικευμένες χρωματογραφικές τεχνικές. Η βασική διαφορά μεταξύ RP HPLC και HIC είναι ότι η RP HPLC χρησιμοποιεί μια πιο πολική κινητή φάση και μια λιγότερο πολική στατική φάση, ενώ η HIC χρησιμοποιεί μια υδρόφοβη στατική φάση, η οποία επιτρέπει στα υδρόφοβα μόρια να προσκολληθούν σε αυτήν.
