Η βασική διαφορά μεταξύ της χρωματοεστίασης και της ισοηλεκτρικής εστίασης είναι ότι η χρωματογραφία είναι ένας τύπος μεθόδου χρωματογραφίας στήλης που χρησιμοποιεί ρητίνες ανταλλαγής ιόντων ενώ η ισοηλεκτρική εστίαση είναι ένας τύπος τεχνικής ηλεκτροφόρησης που χρησιμοποιεί ακινητοποιημένα πηκτώματα βαθμίδωσης pH..
Η χρωματοεστίαση και η ισοηλεκτρική εστίαση είναι δύο τεχνικές που διαχωρίζουν τις πρωτεΐνες ανάλογα με τα ισοηλεκτρικά σημεία τους. Τόσο η χρωματική εστίαση όσο και η ισοηλεκτρική εστίαση έχουν μεγάλη ικανότητα ανάλυσης. Η χρωματογραφία είναι μια μέθοδος χρωματογραφίας στήλης υψηλής ανάλυσης ενώ η ισοηλεκτρική εστίαση είναι μια μέθοδος ηλεκτροφορητικού διαχωρισμού. Επιπλέον, η χρωματική εστίαση δεν χρησιμοποιεί ηλεκτρικό πεδίο ενώ η ισοηλεκτρική εστίαση χρειάζεται ηλεκτρικό πεδίο.
Τι είναι η χρωματική εστίαση;
Η χρωματογραφία εστίασης είναι ένας τύπος χρωματογραφίας υψηλής έκλουσης που διαχωρίζει τις πρωτεΐνες ανάλογα με τις διαφορές στο ισοηλεκτρικό τους σημείο. Χρησιμοποιεί μια στήλη ρητίνης ανταλλαγής ιόντων και μια εσωτερικά ανεπτυγμένη βαθμίδα pH. Σε αντίθεση με την ισοηλεκτρική εστίαση, η χρωματική εστίαση δεν περιλαμβάνει ηλεκτρικό πεδίο. Η χρωματοεστίαση είναι μια ισχυρή τεχνική καθαρισμού που μπορεί να επιλύσει πολύ παρόμοια μόρια ακόμη και που διαφέρουν μόνο κατά 0,02 μονάδες pH. Επομένως, η χρωματική εστίαση ταιριάζει καλύτερα ως τελικό στάδιο στίλβωσης όταν απαιτείται υψηλή ανάλυση για τον διαχωρισμό πολύ παρόμοιων εξαρτημάτων.
Στη χρωματική εστίαση, το δείγμα εφαρμόζεται στη στήλη αναμειγνύοντάς το με το buffer έναρξης. Οι πρωτεΐνες που βρίσκονται σε pH πάνω από το ισοηλεκτρικό τους σημείο είναι αρνητικά φορτισμένες και παραμένουν κοντά στην κορυφή της στήλης, ενώ άλλες πρωτεΐνες που βρίσκονται στο pH κάτω από το ισοηλεκτρικό τους σημείο, μεταναστεύουν προς τα κάτω στη στήλη. Η πρωτεΐνη με το υψηλότερο ισοηλεκτρικό σημείο εκλούεται πρώτη ενώ η πρωτεΐνη με το χαμηλότερο ισοηλεκτρικό σημείο εκλούεται τελευταία από τη στήλη. Αυτή η τεχνική επηρεάζεται από διάφορους παράγοντες όπως η κατακρήμνιση πρωτεϊνών και η γραμμικότητα της βαθμίδας του pH.
Τι είναι η ισοηλεκτρική εστίαση;
Η ισοηλεκτρική εστίαση είναι μια τεχνική που διαχωρίζει διαφορετικά μόρια με βάση το ισοηλεκτρικό τους σημείο. Είναι επίσης γνωστό ως ηλεκτροεστίαση. Αυτή η τεχνική χρησιμοποιείται συχνά για διαχωρισμό πρωτεϊνών σε γέλη. Στην ισοηλεκτρική εστίαση, το δείγμα προστίθεται σε πηκτώματα ακινητοποιημένης βαθμίδωσης pH (IPG). Το IPG gel είναι μια μήτρα γέλης ακρυλαμιδίου συμπολυμερισμένη με βαθμίδωση pH. Οι πρωτεΐνες μεταναστεύουν προς την κάθοδο μέχρι να βρουν την περιοχή pH των ισοηλεκτρικών σημείων τους. Όταν μια πρωτεΐνη φτάσει στο pH που δεν έχει καθαρό φορτίο, η μετανάστευση σταματά και δίνει μια ακίνητη ζώνη. Ομοίως, κάθε πρωτεΐνη δίνει μια ζώνη σε ένα σημείο της βαθμίδας του pH που αντιστοιχεί στο ισοηλεκτρικό της σημείο.
Εικόνα 01: Ισοηλεκτρική εστίαση
Η ισοηλεκτρική εστίαση είναι το πρώτο βήμα της δισδιάστατης ηλεκτροφόρησης γέλης. Σε αυτή την τεχνική, οι πρωτεΐνες αρχικά διαχωρίζονται σύμφωνα με τα ισοηλεκτρικά τους σημεία με ισοηλεκτρική εστίαση και στη συνέχεια διαχωρίζονται με το μοριακό τους βάρος μέσω SDS-PAGE.
Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ της χρωματικής εστίασης και της ισοηλεκτρικής εστίασης;
- Η χρωματική εστίαση και η ισοηλεκτρική εστίαση είναι δύο μέθοδοι με μεγάλη επίλυση.
- Και τα δύο βασίζονται στο ισοηλεκτρικό σημείο των πρωτεϊνών.
- Αυτές οι τεχνικές χρησιμοποιούν μια βαθμίδα pH.
- Και οι δύο διαδικασίες είναι ενημερωτικές για τον χαρακτηρισμό των παραλλαγών της ανθρώπινης αιμοσφαιρίνης.
- Μπορούν να επιλύσουν μόρια όπου οι τιμές pI διαφέρουν κατά μόλις 0,02 μονάδες pH.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ της χρωματικής εστίασης και της ισοηλεκτρικής εστίασης;
Η χρωματογραφία είναι μια τεχνική χρωματογραφίας στήλης υψηλής ανάλυσης που διαχωρίζει τις πρωτεΐνες σύμφωνα με το ισοηλεκτρικό τους σημείο. Αντίθετα, η ισοηλεκτρική εστίαση είναι μια ηλεκτροφορητική τεχνική που διαχωρίζει τις πρωτεΐνες σύμφωνα με το ισοηλεκτρικό τους σημείο με την εφαρμογή ενός ηλεκτρικού πεδίου κατά μήκος μιας βαθμίδας pH που σχηματίζεται σε ένα τριχοειδές. Αυτή είναι λοιπόν η βασική διαφορά μεταξύ της χρωματικής εστίασης και της ισοηλεκτρικής εστίασης.
Μια άλλη διαφορά μεταξύ της χρωματικής εστίασης και της ισοηλεκτρικής εστίασης είναι ότι η χρωματική εστίαση δεν περιλαμβάνει ηλεκτρικό πεδίο ενώ η ισοηλεκτρική εστίαση χρειάζεται ηλεκτρικό πεδίο.
Σύνοψη – Χρωματοεστίαση έναντι ισοηλεκτρικής εστίασης
Η χρωματοεστίαση και η ισοηλεκτρική εστίαση είναι δύο παρόμοιες τεχνικές που έχουν υψηλή ικανότητα διαχωρισμού των μορίων, ιδιαίτερα των πολύ όμοιων μορίων. Η χρωματογραφία είναι μια τεχνική χρωματογραφίας στήλης υψηλής ανάλυσης ενώ η ισοηλεκτρική εστίαση είναι μια μέθοδος ηλεκτροφόρησης. Η χρωματική εστίαση δεν περιλαμβάνει ηλεκτρικό πεδίο, σε αντίθεση με την ισοηλεκτρική εστίαση. Έτσι, αυτό συνοψίζει τη διαφορά μεταξύ της χρωματικής εστίασης και της ισοηλεκτρικής εστίασης.
