Η βασική διαφορά μεταξύ της δοκιμής LAMP και PCR είναι ότι η LAMP διεξάγεται σε σταθερή θερμοκρασία (60-650C) για την παραγωγή αντιγράφων του DNA μέσω ενίσχυσης, ενώ η PCR διεξάγεται χρησιμοποιώντας μια σειρά αλλαγών θερμοκρασίας για την παραγωγή αντιγράφων του DNA μέσω ενίσχυσης.
Το LAMP και η PCR είναι και οι δύο τεχνικές ενίσχυσης in vitro που χρησιμοποιούνται για την παραγωγή χιλιάδων αντιγράφων DNA. Η ποσότητα του DNA που παράγεται στο LAMP είναι πολύ μεγαλύτερη από την ποσότητα που παράγεται σε τεχνικές PCR όπως η RT-PCR. Η LAMP είναι μια νεότερη τεχνική σε σύγκριση με την τεχνική PCR. Αλλά είναι τεχνικά απλό και εύκολο για έναν εκπαιδευμένο επιστήμονα να αποδώσει σε εργαστηριακές συνθήκες. Αυτό το καθιστά μια δυνητικά χρήσιμη τεχνική για την ανίχνευση του COVID-19. Ωστόσο, η RT-PCR είναι η τρέχουσα τυπική δοκιμή για τον COVID-19. Αυτές οι τεχνικές, αν και είναι ευρέως γνωστές σε ερευνητές και κλινικούς ιατρούς με υπόβαθρο στην ενίσχυση του DNA, μπορεί ακόμα να είναι σχετικά άγνωστες σε μια ευρύτερη κοινότητα.
Τι είναι το LAMP Test;
Ισοθερμική ενίσχυση με τη μεσολάβηση βρόχου (LAMP) για τις αναλύσεις COVID-19 ξεκινά με τη συλλογή δειγμάτων από τη μύτη ή το λαιμό χρησιμοποιώντας ένα στυλεό. Τα δείγματα μπορούν επίσης να συλλεχθούν χρησιμοποιώντας άλλες μεθόδους, όπως βλέννα από σκληρό βήχα. Όπως η τεχνική PCR όπως η RT-PCR, το ιικό RNA στο δείγμα μετατρέπεται πρώτα σε DNA, το οποίο επιτρέπει την αντιγραφή του. Η αντίδραση LAMP διεξάγεται σε σταθερή θερμοκρασία (60-650C).
Η ενίσχυση του DNA του ιού που ενσωματώνει την τεχνολογία LAMP και τα αντιδραστήρια μπορεί να ανιχνευθεί όταν το μείγμα της αντίδρασης γίνει θολό λόγω της παραγωγής «πυροφωσφορικού μαγνησίου». Αυτή η θολότητα επιτρέπει την εύκολη διάγνωση του COVID-19 από επιστήμονες και κλινικούς γιατρούς. Η ακρίβεια των αποτελεσμάτων των δοκιμών μπορεί να βελτιωθεί χρησιμοποιώντας ειδικές φθορίζουσες χρωστικές ή βαφές που αλλάζουν χρώμα στο μείγμα αντίδρασης. Αυτές οι χρωστικές αλληλεπιδρούν με το DNA του ιού και η ένταση του φωτός ή της αλλαγής χρώματος μπορεί να μετρηθεί για να δώσει τον αριθμό των μορίων ιικού RNA περίπου εκείνου που ήταν αρχικά στο δείγμα.
Τι είναι η εξέταση PCR;
Η PCR είναι μια πολύ κοινή επιστημονική τεχνική που χρησιμοποιείται ευρέως στην έρευνα και την ιατρική εδώ και 20-30 χρόνια για την ανίχνευση του DNA. Οι δοκιμές PCR χρησιμοποιούνται απευθείας για την ανίχνευση ενός αντιγόνου με την ανίχνευση ιικού RNA. Γενικά, το ιικό RNA υπάρχει στο σώμα πριν ανιχνευθούν αντισώματα ή εμφανιστούν τα συμπτώματα της νόσου. Επομένως, μια δοκιμή PCR μπορεί να πει εάν κάποιος έχει τον ιό ή όχι από νωρίς. Επί του παρόντος, η PCR είναι η τυπική εξέταση για την ανίχνευση του COVID-19. Υπάρχουν διάφοροι τύποι τεχνικών PCR όπως PCR πραγματικού χρόνου, ένθετη PCR, multiplex PCR, hot start PCR και PCR μεγάλης εμβέλειας κ.λπ. Η PCR χρησιμοποιεί μια σειρά από αλλαγές θερμοκρασίας για την παραγωγή αντιγράφων του DNA μέσω ενίσχυσης.
Η RT-PCR είναι μια ειδική έκδοση της τεχνικής PCR. Χρησιμοποιείται όταν ανιχνεύεται RNA. Τώρα χρησιμοποιείται για τη δοκιμή του COVID-19. Η RT-PCR είναι μια αρκετά ευαίσθητη και αξιόπιστη τεχνική. Στην RT-PCR, μόλις συλλεχθεί ένα δείγμα, χρησιμοποιούνται χημικές ουσίες για την αφαίρεση ανεπιθύμητων πρωτεϊνών, λιπών και άλλων μορίων, αφήνοντας πίσω το RNA. Τα ένζυμα του κιτ δοκιμής μετατρέπουν πρώτα το RNA σε DNA, το οποίο στη συνέχεια ενισχύει το DNA του ιού για να ανιχνεύσει τον ιό. Οι φθορίζουσες βαφές χρησιμοποιούνται συνήθως για τη σύνδεση με το ενισχυμένο DNA και την παραγωγή φωτός. Αυτό μπορεί να διαβαστεί από το μηχάνημα για να παραχθεί το αποτέλεσμα της δοκιμής.
Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ της δοκιμής LAMP και PCR;
- Είναι τεχνικές ενισχύσεων.
- Και τα δύο παράγουν αντιγραμμένο DNA.
- Είναι πολύ ευαίσθητες και αξιόπιστες τεχνικές από τις τεχνικές του ανοσοποιητικού όπως η ανίχνευση αντισωμάτων.
- Χρησιμοποιούνται και τα δύο για τεστ COVID-19.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ της δοκιμής LAMP και PCR;
Η βασική διαφορά μεταξύ των δοκιμών LAMP και PCR είναι ότι, στο LAMP, η ενίσχυση επιτυγχάνεται χρησιμοποιώντας σταθερή θερμοκρασία (60-650C), ενώ στην PCR, ο κύκλος του απαιτούνται θερμοκρασίες. Επί του παρόντος διατίθενται διάφοροι τύποι τεχνικών LAMP. Αλλά οι πιο σημαντικές για την ανίχνευση του COVID-19 είναι η ισοθερμική τεχνική με τη μεσολάβηση βρόχου αντίστροφης μεταγραφής (RT-LAMP) και η ενίσχυση μέσω μεταγραφής (TMA). Επιπλέον, διάφοροι τύποι τεχνικών PCR είναι επίσης διαθέσιμοι επί του παρόντος στην κλινική πρακτική για τη διάγνωση ασθενειών, όπως PCR σε πραγματικό χρόνο, RT-PCR, ένθετη PCR, πολυπλεξική PCR, PCR θερμής εκκίνησης, PCR μακράς εμβέλειας, κ.λπ.
Το παρακάτω infographic παραθέτει τις διαφορές μεταξύ της δοκιμής LAMP και της PCR σε μορφή πίνακα.
Σύνοψη – Δοκιμή LAMP έναντι PCR
Η ισοθερμική ενίσχυση με τη μεσολάβηση βρόχου είναι παρόμοια διαδικασία με τις δοκιμές PCR όπως η RT-PCR, αλλά παράγει περισσότερα αντίγραφα DNA του ιού σε σταθερή θερμοκρασία. Το τεστ αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης είναι επί του παρόντος η πιο κοινή και τυπική μορφή δοκιμών στον κόσμο για τη διάγνωση ασθενειών, όπως η διάγνωση του COVID-19. Θεωρείται αρκετά αξιόπιστο. Η PCR χρησιμοποιεί μια σειρά από αλλαγές θερμοκρασίας για την παραγωγή αντιγράφων του DNA μέσω ενίσχυσης. Έτσι, αυτό συνοψίζει τη διαφορά μεταξύ της δοκιμής LAMP και PCR.
