Η βασική διαφορά μεταξύ BL21 και DH5 Alpha είναι ότι το BL21 είναι ένα γενετικά τροποποιημένο ικανό κύτταρο E. coli με ανεπάρκεια πρωτεάσης που χρησιμοποιείται κυρίως για έκφραση πρωτεϊνών, ενώ το DH5 Alpha είναι ένα γενετικά τροποποιημένο ικανό κύτταρο E. coli με μετάλλαξη recA1 που χρησιμοποιείται κυρίως για μετασχηματισμό πλασμιδίου.
E. coli είναι ένας από τους διάσημους οργανισμούς επιλογής για την παραγωγή ανασυνδυασμένης πρωτεΐνης. Έχει γίνει η πιο δημοφιλής πλατφόρμα έκφρασης όλα αυτά τα χρόνια. Χρησιμοποιείται επίσης ως εργοστάσιο κυψελών. Τα BL21 και DH5 Alpha είναι δύο γενετικά τροποποιημένα κύτταρα E. coli που χρησιμοποιούνται επί του παρόντος για έκφραση πρωτεΐνης και μετασχηματισμό πλασμιδίου, αντίστοιχα.
Τι είναι το BL21;
Το BL21 είναι ένα γενετικά τροποποιημένο ικανό κύτταρο E.coli με έλλειψη πρωτεάσης που χρησιμοποιείται κυρίως για έκφραση πρωτεΐνης. Το E. coli BL21 είναι ένα βακτηριακό κύτταρο που προέρχεται από το στέλεχος Β. Έχει ελαττώματα της πρωτεάσης Lon και της πρωτεάσης της εξωτερικής μεμβράνης. Χρησιμοποιείται συνήθως για την έκφραση ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών επειδή συνήθως φέρνει σταθερότητα στις εκφραζόμενες πρωτεΐνες. Το BL21 είναι χρήσιμο για έκφραση πρωτεΐνης με pCold I-IV DNA και pCold TF DNA. Αλλά αυτό το ικανό κύτταρο Ε. coli δεν προορίζεται για ένα σύστημα έκφρασης πρωτεΐνης που χρησιμοποιεί προαγωγέα Τ7 όπως το σύστημα ρΕΤ. Ο λόγος πίσω από αυτό είναι ότι το BL21 δεν εκφράζει Τ7 RNA πολυμεράση. Επιπλέον, δεν συνιστάται η χρήση του για την κατασκευή ή την παρασκευή πλασμιδίου καθώς δεν έχει μετάλλαξη recA.
Εικόνα 01: BL21
Το BL21 περιγράφηκε για πρώτη φορά από τον Studier το 1986 μετά από διάφορες τροποποιήσεις της γραμμής Β. Τα κύτταρα BL21 έχουν έλλειψη της πρωτεάσης LON, η οποία αποικοδομεί πολλές ξένες πρωτεΐνες. Επιπλέον, λείπει ένα άλλο γονίδιο που κωδικοποιεί την πρωτεάση της εξωτερικής μεμβράνης (OmpT) του οποίου η λειτουργία είναι να αποικοδομεί εξωκυτταρικές πρωτεΐνες. Η έλλειψη αυτών των πρωτεϊνών πυροδοτεί την επιτυχή παραγωγή ξένης πρωτεΐνης στα κύτταρα E. coli BL21. Επιπλέον, η μετάλλαξη hsdSB σε αυτά τα κύτταρα αποτρέπει τη μεθυλίωση του ξένου DNA και τη διάσπαση στα κύτταρα BL21.
Τι είναι το DH5 Alpha;
DH5 Alpha είναι ένα γενετικά τροποποιημένο ικανό κύτταρο E. coli με μετάλλαξη recA1 που χρησιμοποιείται κυρίως για μετασχηματισμό πλασμιδίου. Τα κύτταρα DH5 Alpha E. coli κατασκευάζονται γενετικά από τον Αμερικανό βιολόγο Douglas Hanahan για τη μεγιστοποίηση της αποτελεσματικότητας του μετασχηματισμού. Το άλφα κύτταρο DH5 έχει τρεις διακριτές μεταλλάξεις: recA1, endA1 και lacZΔM15. Το recA1 είναι μια μετάλλαξη ενός σημείου που αντικαθιστά τη γλυκίνη 160 με ένα υπόλειμμα ασπαρτικού οξέος στο πολυπεπτίδιο recA. Αυτή η μετάλλαξη απενεργοποιεί τη δραστηριότητα των ανασυνδυασών και απενεργοποιεί τον ομόλογο ανασυνδυασμό. Η μετάλλαξη endA1 απενεργοποιεί μια ενδοκυτταρική ενδονουκλεάση που την εμποδίζει να αποικοδομήσει το εισαγόμενο πλασμίδιο.
Εικόνα 02: DH5 Alpha
Επιπλέον, η μετάλλαξη lacZΔM15 επιτρέπει τον έλεγχο μπλε-λευκού μετασχηματισμένων κυττάρων. Αυτά τα κύτταρα είναι ικανά κύτταρα. Συχνά χρησιμοποιούνται με μετασχηματισμό χλωριούχου ασβεστίου για την εισαγωγή του επιθυμητού πλασμιδίου. Αναγνωρίστηκε από πρόσφατη έρευνα ότι το κύτταρο DH5 Alpha με τη μέθοδο Hanahan ήταν το πιο αποτελεσματικό ικανό κύτταρο για μετασχηματισμό πλασμιδίου.
Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ BL21 και DH5 Alpha;
- Το BL21 και το DH5 Alpha είναι δύο γενετικά τροποποιημένα E.coli
- Και τα δύο είναι ικανά κύτταρα.
- Αποτελούνται από διακριτές μεταλλάξεις.
- Και οι δύο δεν έχουν φυσικό περιβάλλον.
- Αυτά χρησιμοποιούνται για εργαστηριακούς σκοπούς, όπως μελέτες έκφρασης και διαδικασίες κλωνοποίησης.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ BL21 και DH5 Alpha;
Το BL21 είναι ένα γενετικά τροποποιημένο ικανό κύτταρο E. coli με ανεπάρκεια πρωτεάσης που χρησιμοποιείται κυρίως για έκφραση πρωτεΐνης. Από την άλλη πλευρά, το DH5 Alpha είναι ένα γενετικά τροποποιημένο ικανό κύτταρο E. coli με μετάλλαξη recA1 που χρησιμοποιείται κυρίως για μετασχηματισμό πλασμιδίου. Έτσι, αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ BL21 και DH5 Alpha. Επιπλέον, το κύτταρο BL21 E. coli δεν έχει μετάλλαξη recA1, ενώ το κύτταρο DH5 Alpha E. coli έχει μετάλλαξη recA1.
Το παρακάτω infographic παραθέτει τις διαφορές μεταξύ BL21 και DH5 Alpha σε μορφή πίνακα.
Σύνοψη – BL21 vs DH5 Alpha
Τα μη παθογόνα στελέχη του E. coli έχουν αναπτυχθεί γενετικά από επιστήμονες για εργαστηριακές μελέτες έκφρασης και σκοπούς κλωνοποίησης. Τα BL21 και DH5 Alpha είναι δύο γενετικά τροποποιημένα κύτταρα E. coli. Το BL21 χρησιμοποιείται κυρίως για μελέτες έκφρασης πρωτεϊνών. Από την άλλη πλευρά, το DH5 Alpha χρησιμοποιείται κυρίως για σκοπούς μετασχηματισμού πλασμιδίου. Έτσι, αυτή είναι η περίληψη της διαφοράς μεταξύ BL21 και DH5 Alpha.
