Βασική διαφορά – RPMI vs DMEM
Οι περισσότερες ερευνητικές μελέτες περιλαμβάνουν καλλιέργεια ζωικών κυττάρων και, επομένως, αυτές οι μελέτες απαιτούν διατήρηση ζωικών κυτταρικών σειρών υπό ειδικές συνθήκες ανάπτυξης. Η καλλιέργεια ζωικών κυττάρων πραγματοποιείται ευρέως σε φαρμακολογικές μελέτες για τον εντοπισμό του μεταβολισμού των φαρμάκων, στη διάγνωση ασθενειών και στην έρευνα για τον καρκίνο. Το μέσο κυτταρικής καλλιέργειας είναι μια σημαντική πτυχή της καλλιέργειας ζωικών κυττάρων. Το Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) και το Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI) είναι δύο μέσα καλλιέργειας που χρησιμοποιούνται στην καλλιέργεια ζωικών κυττάρων. Το RPMI είναι ένα μέσο που χρησιμοποιείται ευρέως για την καλλιέργεια κυττάρων θηλαστικών σε καλλιέργεια εναιωρήματος. Το DMEM είναι ένας τροποποιημένος τύπος βασικού μέσου, με αυξημένες συγκεντρώσεις αμινοξέων και βιταμινών έως και τέσσερις φορές. Το DMEM χρησιμοποιείται στην καλλιέργεια κυττάρων σε προσκολλημένες καλλιέργειες. Η βασική διαφορά μεταξύ των δύο μέσων είναι ο τύπος της κουλτούρας των μέσων. Το RPMI χρησιμοποιείται σε καλλιέργειες εναιωρήματος, ενώ το DMEM χρησιμοποιείται για την καλλιέργεια προσκολλημένων κυττάρων.
Τι είναι το RPMI;
Το RPMI ή το Roswell Park Memorial Institute Medium αναφέρεται επίσης ως RPMI 1640. Το όνομα του μέσου προήλθε από το ινστιτούτο στο οποίο ανακαλύφθηκαν τα μέσα. Αυτό το μέσο χρησιμοποιείται συνήθως σε καλλιέργεια ζωικών κυττάρων, ειδικά για την ανάπτυξη κυττάρων θηλαστικών. Αρχικά αναπτύχθηκαν για την ανάπτυξη ανθρώπινων λεμφοκυττάρων.
Τα ακόλουθα συστατικά περιλαμβάνονται στο RPMI.
- Γλυκόζη
- δείκτης pH (κόκκινο φαινόλης)\
- Άλατα (χλωριούχο νάτριο, διττανθρακικό νάτριο, φωσφορικό δινάτριο, χλωριούχο κάλιο, θειικό μαγνήσιο και νιτρικό ασβέστιο)
- Αμινοξέα
- Βιταμίνες (ι-ινοσιτόλη, χλωριούχο χολίνη, παρα-αμινοβενζοϊκό οξύ, φολικό οξύ, νικοτιναμίδη, υδροχλωρική πυριδοξίνη, υδροχλωρική θειαμίνη, παντοθενικό ασβέστιο, βιοτίνη και ριβοφλαβίνη, κυανοκοβαλαμίνη)
Το ιδιαίτερο χαρακτηριστικό του RPMI είναι η αυξημένη συγκέντρωση φωσφορικών στο μέσο. Το RPMI χρησιμοποιείται σε ατμόσφαιρα διοξειδίου του άνθρακα 5%. Αυτό θα παρέχει τις μέγιστες και βέλτιστες συνθήκες για την ανάπτυξη των κυττάρων. Το pH του μέσου διατηρείται στο 8,0 από το ρυθμιστικό σύστημα διττανθρακικών.
Εικόνα 01: Κυτταρική καλλιέργεια σε τρυβλίο Petri
Εφαρμογές του RPMI στην καλλιέργεια κυττάρων
- Καλλιέργεια ανθρώπινων Τ και Β λεμφοκυττάρων, κυττάρων μυελού των οστών και υβριδώματος.
- Χρησιμοποιείται για τη μελέτη ανθρώπινων νεοπλασματικών κυττάρων.
Τι είναι το DMEM;
Το Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) είναι ένα τροποποιημένο μέσο που παρασκευάζεται εμπορικά. Η αρχική υφή της μεσαίας σκόνης είναι κίτρινη. Στο DMEM, η συγκέντρωση της βιταμίνης αυξάνεται έως και τέσσερις φορές αυξάνοντας έτσι την περιεκτικότητα σε θρεπτικά συστατικά στο μέσο.
Το DMEM τροποποιείται επίσης με την προσθήκη περισσότερων αλάτων όπως ο νιτρικός σίδηρος, το πυροσταφυλικό νάτριο και ορισμένα μη απαραίτητα αμινοξέα όπως η σερίνη και η γλυκίνη. Η σύνθεση της γλυκόζης στα μέσα αλλάζει επίσης. Η αρχική σύνθεση αποτελείται από 1000 mg/L γλυκόζης, ενώ στο DMEM, η συγκέντρωση αυξάνεται έως και 4500 mg/L. Το DMEM απαιτεί επίσης συμπλήρωμα ενός μέσου ορού καθώς δεν είναι πλήρες μέσο. Τις περισσότερες φορές, το DMEM συμπληρώνεται με ορό εμβρύου βοοειδών (FBS). Το FBS παρέχει τις απαιτούμενες πρωτεΐνες και αυξητικούς παράγοντες για τη διαδικασία καλλιέργειας.
Το pH του μέσου ποικίλλει κατά την προσθήκη διττανθρακικού νατρίου. Το pH του μέσου πριν από την προσθήκη διττανθρακικού νατρίου είναι περίπου 6,80 – 7,40, ενώ το pH μετά την προσθήκη διττανθρακικού νατρίου κυμαίνεται από 7,60 – 8,20. Η θερμοκρασία αποθήκευσης του μέσου είναι 2 – 8 0C.
Εικόνα 02: DMEM
Εφαρμογές του DMEM
- Για τη μελέτη της ικανότητας σχηματισμού πλάκας του ιού πολυομώματος σε εμβρυϊκά κύτταρα ποντικού.
- Σε μελέτες αναστολής επαφής.
- Σε έρευνα και ανάλυση καλλιέργειες κυττάρων κοτόπουλου.
Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ RPMI και DMEM;
- Τόσο το RPMI όσο και το DMEM χρησιμοποιούνται σε καλλιέργειες ζωικών κυττάρων.
- Και τα δύο μέσα RPMI και DMEM είναι υγρά σκευάσματα.
- Τόσο τα μέσα RPMI όσο και τα DMEM περιέχουν τα απαραίτητα αμινοξέα, βιταμίνες και ανόργανα άλατα που απαιτούνται για την ανάπτυξη.
- Και τα δύο μέσα RPMI και DMEM δεν είναι πλήρη. Επομένως, πρέπει να προστεθεί ορός.
- Τόσο τα μέσα RPMI όσο και τα μέσα DMEM χρησιμοποιούν γλυκόζη ως πηγή άνθρακα.
- Τόσο τα μέσα RPMI όσο και τα μέσα DMEM έχουν υψηλότερο pH.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ RPMI και DMEM;
RPMI vs DMEM |
|
| Το RPMI είναι ένα μέσο που χρησιμοποιείται ευρέως για την καλλιέργεια κυττάρων θηλαστικών σε καλλιέργεια εναιωρήματος. | Το DMEM είναι ένας τροποποιημένος τύπος βασικού μέσου με αυξημένες συγκεντρώσεις αμινοξέων και βιταμινών. |
| Παρουσία επιπλέον φωσφορικών αλάτων | |
| Παρουσία σε RPMI. | Απών στο DMEM. |
| Χρήση | |
|
Χρησιμοποιείται για την καλλιέργεια κυττάρων σε προσκολλημένες καλλιέργειες. Είναι συνηθισμένο,
|
| Τύποι πολιτισμού | |
| Το RPMI χρησιμοποιείται για καλλιέργειες εναιωρήματος. | Το DMEM χρησιμοποιείται για καλλιέργειες με προσκολλημένα κύτταρα. |
Σύνοψη – RPMI vs DMEM
Τόσο το RPMI όσο και το DMEM χρησιμοποιούνται ευρέως στην καλλιέργεια ζωικών κυττάρων, ειδικά στην καλλιέργεια ζωικών κυτταρικών σειρών συμπεριλαμβανομένων των λεμφοκυττάρων in vitro. Το DMEM είναι ένα τροποποιημένο βασικό μέσο όπου υπάρχει αυξημένη συγκέντρωση θρεπτικών συστατικών. Το RPMI αναπτύχθηκε από το Roswell Park Memorial Institute και είναι επίσης ένα μέσο που χρησιμοποιείται στην καλλιέργεια ζωικών κυττάρων ειδικά για λεμφοκύτταρα θηλαστικών. Και τα δύο μέσα διατίθενται στο εμπόριο. Αυτή είναι η διαφορά μεταξύ RPMI και DMEM.
