Η βασική διαφορά μεταξύ του συνολικού αριθμού κυττάρων και του αριθμού βιώσιμων κυττάρων είναι ότι ο συνολικός αριθμός κυττάρων υπολογίζει όλα τα κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων τόσο των ζωντανών όσο και των νεκρών μικροβιακών κυττάρων σε ένα δείγμα, ενώ ο αριθμός των βιώσιμων κυττάρων υπολογίζει μόνο τα ζωντανά μικροβιακά κύτταρα σε ένα δείγμα.
Η καταμέτρηση του αριθμού των οργανισμών σε έναν πληθυσμό θεωρείται απαραίτητη για τις περισσότερες πειραματικές εργασίες. Επομένως, προσπαθούμε να αναλύσουμε τον αριθμό των μικροβίων σε ένα δείγμα χρησιμοποιώντας άμεσες και έμμεσες μεθόδους. Οι άμεσες μετρήσεις περιλαμβάνουν μεθόδους που μετρούν απευθείας τους αριθμούς των κυττάρων. Οι έμμεσες μετρήσεις περιλαμβάνουν τη μέτρηση κάποιας παραμέτρου που μπορεί να σχετίζεται με τον αριθμό των κυττάρων, όπως η πυκνότητα των κυττάρων, το ξηρό βάρος κ.λπ. Ορισμένες μέθοδοι ποσοτικοποιούν μόνο τα ζωντανά μικροβιακά κύτταρα σε ένα δείγμα. Ο αριθμός των βιώσιμων κυττάρων είναι μια τέτοια μέθοδος. Οι άμεσες μικροσκοπικές μετρήσεις ποσοτικοποιούν όλα τα κύτταρα σε έναν γνωστό όγκο μέσου/δείγματος χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο. Επομένως, μετράει τόσο ζωντανά όσο και νεκρά κύτταρα. Είναι ένας τύπος συνολικού αριθμού κυττάρων.
Τι είναι ο συνολικός αριθμός κυττάρων;
Ο συνολικός αριθμός κυττάρων είναι η μέθοδος που περιλαμβάνει τη μέτρηση όλων των κυττάρων σε έναν γνωστό όγκο μέσου/δείγματος χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο και θάλαμο μέτρησης (αιμοκυτταρόμετρο). Σε αντίθεση με τις βιώσιμες μετρήσεις, μετρώνται τόσο τα ζωντανά όσο και τα νεκρά κύτταρα. Επομένως, αυτός είναι ένας συνολικός αριθμός, εκτός εάν εφαρμοστεί κηλίδα βιωσιμότητας κατά τη διάρκεια της παρατήρησης. Στη μικροσκοπία, τα κύτταρα παρατηρούνται απευθείας στο μικροσκόπιο και μετρώνται. Χρησιμοποιεί ένα κυτταρικό εναιώρημα που αποτελείται από μικροβιακά κύτταρα. Για ευκολία καταμέτρησης και ακριβείς μετρήσεις, μπορεί να γίνει αραίωση του δείγματος. Σε πολύ υψηλές/χαμηλές συγκεντρώσεις κυττάρων, η λήψη του συνολικού αριθμού κυττάρων με τη χρήση μικροσκοπίου είναι μια δύσκολη εργασία.
Εικόνα 01: Θάλαμος μέτρησης – Αιμοκυτταρόμετρο
Οι θάλαμοι μέτρησης είναι εύκολοι, φθηνοί και γρήγοροι στη λήψη του συνολικού αριθμού κυττάρων. Το πιο σημαντικό, οι θάλαμοι μέτρησης είναι χρήσιμοι για τη μέτρηση τόσο των ευκαρυωτών όσο και των προκαρυωτικών. Μετράμε κελιά σε επιλεγμένα τετράγωνα γνωστού όγκου για να ποσοτικοποιήσουμε τον συνολικό αριθμό κελιών.
Τι είναι ο αριθμός βιώσιμων κυττάρων;
Ο αριθμός βιώσιμων κυττάρων είναι μια μέθοδος μέτρησης ζωντανών μικροβιακών κυττάρων σε ένα δείγμα. Μετρά μόνο ζωντανά κύτταρα στο δείγμα. Ο αριθμός βιώσιμων πλακών, η διήθηση μεμβράνης και ο πιο πιθανός αριθμός είναι λίγες τεχνικές μέτρησης βιώσιμων κυττάρων. Αυτές οι προσεγγίσεις βασίζονται στην ανάπτυξη. Η μέθοδος καταμέτρησης βιώσιμων πλακών είναι μια ισχυρή μέθοδος που χρησιμοποιείται σε πολλούς μικροβιολογικούς τομείς, συμπεριλαμβανομένης της μικροβιολογίας τροφίμων και γαλακτοκομικών προϊόντων, της ιατρικής μικροβιολογίας, της περιβαλλοντικής μικροβιολογίας, της μικροβιακής γενετικής, της ανάπτυξης μέσων ανάπτυξης και της βιοτεχνολογίας.
Ο πιο συνηθισμένος τρόπος μέτρησης βιώσιμων βακτηρίων είναι να χρησιμοποιήσετε ένα δείγμα ικανό να σχηματίσει αποικίες σε ένα μέσο άγαρ. Υπάρχουν δύο κύριοι τρόποι για να εκτελέσετε μια μέτρηση πλάκας: τεχνική απλώσεως πλάκας και τεχνική πλάκας χύτευσης. Ένας γνωστός όγκος δείγματος μπορεί είτε να απλωθεί στην επιφάνεια μιας πλάκας άγαρ είτε να αναμιχθεί στο άγαρ. Η πλάκα στη συνέχεια επωάζεται και μετρώνται οι προκύπτουσες αποικίες. Ο αριθμός των αποικιών σχετίζεται με τον αριθμό των μικροοργανισμών στο αρχικό δείγμα. Οι βιώσιμες μετρήσεις μετρούν μόνο εκείνα τα κύτταρα που είναι ζωντανά και αναπτύσσονται.
Εικόνα 02: Βιώσιμος αριθμός πλακών
Ο πιο πιθανός αριθμός (MPN) είναι μια εναλλακτική λύση στις μεθόδους μέτρησης πλακών για την εκτίμηση της πυκνότητας πληθυσμού βιώσιμων κυττάρων. Μετρά τους οργανισμούς που αναπτύσσονται σε υγρή καλλιέργεια και είναι επομένως μια κυρίως βακτηριολογική τεχνική. Είναι ιδιαίτερα χρήσιμο για χαμηλές συγκεντρώσεις οργανισμών π.χ. γάλα, πόσιμο νερό.
Η τεχνική φιλτραρίσματος με μεμβράνη είναι πιο κατάλληλη όταν τα μικρόβια είναι πολύ αραιά όπως στην παροχή νερού μιας πόλης. Γίνεται απλά περνώντας έναν γνωστό όγκο του υγρού μέσα από ένα φίλτρο και επωάζοντάς το σε θρεπτικό μέσο. Οι αποικίες που αναπτύσσονται στο φίλτρο καταμετρώνται και υπολογίζονται τα βακτήρια ανά χιλιοστόλιτρο του δείγματος.
Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ του συνολικού αριθμού κυττάρων και του αριθμού βιώσιμων κυττάρων;
- Ο συνολικός αριθμός κυττάρων και ο αριθμός βιώσιμων κυττάρων είναι δύο τύποι μικροβιακών τεχνικών που ποσοτικοποιούν τα κύτταρα.
- Είναι κοινώς χρησιμοποιούμενες τεχνικές απαρίθμησης σε μικροβιολογικά εργαστήρια.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ του συνολικού αριθμού κυττάρων και του αριθμού βιώσιμων κυττάρων;
Ο συνολικός αριθμός κυττάρων απαριθμεί όλα τα ζωντανά και τα νεκρά μικροβιακά κύτταρα σε ένα δείγμα. Αντίθετα, ο αριθμός βιώσιμων κυττάρων απαριθμεί μόνο τα ζωντανά κύτταρα σε ένα δείγμα. Έτσι, αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ του συνολικού αριθμού κυττάρων και του αριθμού των βιώσιμων κυττάρων. Ο συνολικός αριθμός κυττάρων είναι ανεξάρτητος από την ανάπτυξη αποικιών σε πλάκες άγαρ, ενώ ο αριθμός βιώσιμων κυττάρων είναι μια τεχνική που βασίζεται στην ανάπτυξη και εξαρτάται από την ανάπτυξη μικροβιακών αποικιών σε πλάκες άγαρ.
Το παρακάτω γραφικό πληροφοριών συνοψίζει τη διαφορά μεταξύ του συνολικού αριθμού κυττάρων και του αριθμού βιώσιμων κυττάρων.
Σύνοψη – Συνολικός αριθμός κυττάρων έναντι αριθμού βιώσιμων κυττάρων
Ο συνολικός αριθμός κυττάρων απαριθμεί ζωντανά και νεκρά μικροβιακά κύτταρα, ενώ ο αριθμός βιώσιμων κυττάρων απαριθμεί μόνο τα ζωντανά κύτταρα. Έτσι, αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ του συνολικού αριθμού κυττάρων και του αριθμού των βιώσιμων κυττάρων. Επίσης, ο αριθμός βιώσιμων κυττάρων είναι μια τεχνική που βασίζεται στην ανάπτυξη, σε αντίθεση με τον συνολικό αριθμό κυττάρων. Επιπλέον, απαιτεί επώαση των πλακών μέχρι να ληφθούν οι ορατές αποικίες. Ο αριθμός βιώσιμων πλακών, το MPN και η διήθηση μεμβράνης είναι λίγες τεχνικές καταμέτρησης βιώσιμων κυττάρων, ενώ η άμεση μικροσκοπία και η χρήση αιμοκυτταρομέτρου είναι δύο τεχνικές ολικού αριθμού κυττάρων.
