Η βασική διαφορά μεταξύ ισοκρατικής και βαθμιδωτής έκλουσης είναι ότι η ισοκρατική έκλουση αναφέρεται στη διατήρηση σταθερής συγκέντρωσης στην κινητή φάση, ενώ η έκλουση βαθμίδωσης αναφέρεται στη διατήρηση μιας μεταβαλλόμενης συγκέντρωσης στην κινητή φάση.
Οι όροι ισοκρατική και βαθμιδωτή έκλουση χρησιμοποιούνται στη χρωματογραφία. Κατά τη διάρκεια μιας χρωματογραφικής διαδρομής, χρησιμοποιούμε μια στατική φάση, η οποία είναι μια μη κινούμενη ουσία, μαζί με μια κινητή φάση, την κινούμενη ουσία. Η ισοκρατική και βαθμιδωτή έκλουση περιγράφει τις ιδιότητες της κινητής φάσης.
Τι είναι η Ισοκρατική Έκλουση;
Η ισοκρατική έκλουση είναι ένας όρος που χρησιμοποιείται στη χρωματογραφία όταν η κινητή φάση έχει σταθερή συγκέντρωση. Εδώ, η συγκέντρωση της κινητής φάσης είναι σταθερή σε όλη τη χρωματογραφική διαδικασία. Σε αυτή τη διαδικασία, μπορούμε να παρατηρήσουμε το πλάτος της κορυφής να αυξάνεται με το χρόνο συγκράτησης γραμμικά στο χρωματογράφημα. Ωστόσο, αυτό οδηγεί σε ένα μειονέκτημα - οι κορυφές όψιμης έκλουσης για όψιμη έκλουση γίνονται πολύ επίπεδες και ευρείες. Επομένως, αυτές οι ευρείες κορυφές είναι δύσκολο να αναγνωριστούν ως κορυφές.
Επιπλέον, στην ισοκρατική έκλουση, η επιλεκτικότητα δεν αλλάζει ανάλογα με τις διαστάσεις της στήλης. Αυτό σημαίνει ότι η επιλεκτικότητα δεν εξαρτάται από τις αλλαγές στις διαστάσεις της στήλης. Εδώ, το μήκος και η διάμετρος θεωρούνται ως διαστάσεις στήλης. Επομένως, οι κορυφές εκλούονται με την ίδια σειρά.
Τι είναι Gradient Elution;
Η έκλουση με κλίση είναι ένας όρος που χρησιμοποιείται στη χρωματογραφία όταν εδώ η κινητή φάση έχει ποικίλη συγκέντρωση. Με άλλα λόγια, η συγκέντρωση της κινητής φάσης δεν χρειάζεται να παραμένει σταθερή. Για παράδειγμα, στην HPLC, μια κοινή μέθοδος διαχωρισμού χρησιμοποιεί αρχικά μεθανόλη 10% και καταλήγει στο 90%, αυξάνοντας σταδιακά τη συγκέντρωση. Η κινητή φάση έχει δύο συστατικά: έναν ασθενή διαλύτη και έναν ισχυρό διαλύτη. Ο αδύναμος διαλύτης επιτρέπει στη διαλυμένη ουσία να εκλούεται αργά, ενώ ο ισχυρός διαλύτης προκαλεί την ταχεία έκλουση της διαλυμένης ουσίας. Στη χρωματογραφία αντίστροφης φάσης, χρησιμοποιούμε νερό ως αδύναμο διαλύτη και οργανικό διαλύτη ως ισχυρό διαλύτη.
Εικόνα 01: HPLC
Επιπλέον, η μέθοδος έκλουσης βαθμίδωσης μειώνει τα συστατικά έκλουσης αργότερα για να τα κάνει να εκλούονται πιο γρήγορα, δίνοντας μια στενή κορυφή στο χρωματογράφημα. Αυτή η μέθοδος βελτιώνει το σχήμα της κορυφής και το ύψος της κορυφής επίσης. Επιπλέον, στην τεχνική έκλουσης κλίσης, η σειρά έκλουσης αλλάζει με τις αλλαγές στις διαστάσεις της στήλης.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ Ισοκρατικής και Διαβαθμισμένης Έκλουσης;
Οι όροι ισοκρατική και βαθμιδωτή έκλουση χρησιμοποιούνται στη χρωματογραφία. Η ισοκρατική και η βαθμιδωτή έκλουση περιγράφουν τις ιδιότητες της κινητής φάσης. Η βασική διαφορά μεταξύ ισοκρατικής και βαθμιδωτής έκλουσης είναι ότι η ισοκρατική έκλουση αναφέρεται στη διατήρηση μιας σταθερής συγκέντρωσης στην κινητή φάση ενώ η βαθμιδωτή έκλουση αναφέρεται στη διατήρηση μιας μεταβαλλόμενης συγκέντρωσης στην κινητή φάση.
Στην τεχνική ισοκρατικής έκλουσης, το πλάτος της κορυφής αυξάνεται γραμμικά με το χρόνο συγκράτησης. Ωστόσο, στην τεχνική έκλουσης βαθμίδωσης, η συγκράτηση των συστατικών που εκλούονται αργότερα μειώνεται, έτσι ώστε η έκλουση να γίνεται ταχύτερη και να δίνει στενές κορυφές. Εκτός από αυτό, στην ισοκρατική έκλουση, η επιλεκτικότητα δεν εξαρτάται από τις διαστάσεις της στήλης, αλλά στην έκλουση βαθμίδας, η επιλεκτικότητα αλλάζει με την αλλαγή των διαστάσεων της στήλης.
Ο ακόλουθος πίνακας συνοψίζει τη διαφορά μεταξύ ισοκρατικής και βαθμιδωτής έκλουσης.
Σύνοψη – Ισοκρατική vs Gradient Elution
Η ισοκρατική έκλουση και η βαθμιδωτή έκλουση περιγράφουν τις ιδιότητες της κινητής φάσης. Η βασική διαφορά μεταξύ ισοκρατικής και βαθμιδωτής έκλουσης είναι ότι η ισοκρατική έκλουση αναφέρεται στη διατήρηση μιας σταθερής συγκέντρωσης στην κινητή φάση ενώ η βαθμιδωτή έκλουση αναφέρεται στη διατήρηση μιας μεταβαλλόμενης συγκέντρωσης στην κινητή φάση.
