Η βασική διαφορά μεταξύ της διήθησης γέλης και της χρωματογραφίας συγγένειας είναι ότι η χρωματογραφία διήθησης γέλης εξαρτάται από τις διαφορές στο μοριακό βάρος ή το μέγεθος του δείγματος της αναλυόμενης ουσίας, ενώ η χρωματογραφία συγγένειας εξαρτάται από τη συγγένεια μιας αναλυόμενης ουσίας με έναν ακινητοποιημένο συνδετήρα.
Ο όρος χρωματογραφία στην αναλυτική χημεία αναφέρεται στη διαδικασία του διαχωρισμού των συστατικών σε ένα μείγμα χρησιμοποιώντας διαφορετικές τεχνικές. Η χρωματογραφία είναι ένα συλλογικό όνομα που αντιπροσωπεύει έναν αριθμό διαφορετικών μεθόδων διαχωρισμού.
Τι είναι η χρωματογραφία διήθησης γέλης;
Η χρωματογραφία διήθησης γέλης είναι μια αναλυτική τεχνική στην οποία ο διαχωρισμός των συστατικών εξαρτάται από τη διαφορά στο μοριακό βάρος ή το μέγεθος. Αυτή η τεχνική είναι επίσης γνωστή ως χρωματογραφία αποκλεισμού μεγέθους ή χρωματογραφία μοριακού κόσκινου. Η τεχνική διαχωρισμού σε αυτή τη διαδικασία εξαρτάται από τη διαφορετική ικανότητα των μορίων στο δείγμα να εισέρχονται στους πόρους του μέσου διήθησης γέλης.
Στην τεχνική διήθησης γέλης, η στατική φάση περιέχει σφαιρίδια από ενυδατωμένο υλικό που μοιάζει με σφουγγάρι με πόρους μοριακών διαστάσεων που περιέχουν ένα στενό εύρος μεγεθών. Εάν περάσουμε ένα υδατικό διάλυμα που αποτελείται από μόρια διαφόρων μεγεθών μέσα από μια στήλη που περιέχει αυτά τα «μοριακά κόσκινα», τα μόρια που είναι μεγαλύτερα από τους πόρους του μέσου διήθησης κινούνται γρήγορα μέσα από τη στήλη. Αντίθετα, τα μικρότερα μόρια εισέρχονται στους πόρους της γέλης και τείνουν να κινούνται αργά μέσα από τη στήλη. Τα μόρια εκλούονται από τη στήλη κατά σειρά φθίνουσας μοριακής κλίμακας. Εδώ, το όριο αποκλεισμού της γέλης είναι η μοριακή μάζα των μικρότερων μορίων που δεν μπορούν να διεισδύσουν στους πόρους μιας δεδομένης γέλης.
Υπάρχουν διαφορετικοί τύποι τεχνικών διήθησης γέλης, όπως μέθοδος έμμεσης διήθησης γέλης, διήθηση γέλης σταθερής κατάστασης, αιμοκάθαρση με σφαιρίδια γέλης, κ.λπ. Η έμμεση χρωματογραφία διήθησης γέλης είναι χρήσιμη για τον προσδιορισμό των ελεύθερων θυρεοειδικών ορμονών. Η χρωματογραφία διήθησης γέλης σταθερής κατάστασης είναι μια έμμεση τεχνική που είναι χρήσιμη κυρίως για τη μέτρηση ελεύθερων στεροειδών όπως η κορτιζόλη, η τεστοστερόνη κ.λπ.
Τι είναι η χρωματογραφία συγγένειας;
Η χρωματογραφία συγγένειας είναι μια αναλυτική τεχνική και μια μέθοδος διαχωρισμού που εξαρτάται από μια ειδική αλληλεπίδραση δέσμευσης μεταξύ ενός ακινητοποιημένου συνδέτη και του εταίρου πρόσδεσής του. Μερικά παραδείγματα περιλαμβάνουν δέσμευση αντισώματος-αντιγόνου, δέσμευση ενζύμου-υποστρώματος και δέσμευση ενζύμου-αναστολέα. Επομένως, αυτή η τεχνική έχει πολλές σημαντικές εφαρμογές στον καθαρισμό νουκλεϊκών οξέων, στον καθαρισμό πρωτεϊνών από εκχυλίσματα κυττάρων και στον καθαρισμό από το αίμα.
Σε αυτήν την τεχνική, η πιο σημαντική ιδιότητα είναι η ακινητοποίηση συνδέτη. Μπορούμε να χρησιμοποιήσουμε διάφορα υλικά όπως ακρυλικά και σιλικαζέλ για αυτό. Είναι σημαντικό να αποτραπεί η στερεοχημική παρεμβολή του μορίου στόχου στον συνδέτη. Επιπλέον, ένας αναστολέας συνδέεται στη στερεά φάση. Ονομάζουμε αυτόν τον αναστολέα διαχωριστή. Κλασικά, ένας διαχωριστής αποτελείται από μια αλυσίδα υδρογονάνθρακα.
Η στατική φάση της χρωματογραφίας συγγένειας περιέχει τον πυρήνα, τον διαχωριστή και το πρόσδεμα. Μερικές φορές, έχει επίσης ένα ιόν μετάλλου που συνδέεται με τον συνδέτη. Η πιο προτιμώμενη στερεά φάση για τη στατική φάση σε αυτή την τεχνική είναι η γέλη αγαρόζης επειδή διανέμεται εύκολα για να γεμίσει και να γεμίσει τη στήλη με στρώματα ρητίνης οποιουδήποτε μεγέθους και είναι αρκετά μεγάλη ώστε τα βιομόρια να ρέουν ελεύθερα μέσα και μέσα από τα σφαιρίδια. Οι συνδέτες μπορούν να προσκολληθούν ομοιοπολικά στο πολυμερές σφαιριδίων με διάφορους τρόπους. Οι πιο κοινές ενώσεις διαχωρισμού είναι το βρωμιούχο κυανογόνο, το εποξείδιο, το εποξείδιο με C6 οξύ και η διαμίνη. Από την άλλη πλευρά, το πρόσδεμα που μπορούμε να χρησιμοποιήσουμε διαφέρει ανάλογα με τον στόχο, π.χ., αντισώματα-αντιγόνο, ιόντα σιδήρου ή αργιλίου-φωσφοπρωτεΐνες, αβιδίνη-βιοτίνη, γλουταθειόνη-GST, πρωτεΐνες με επισήμανση χηλικού παράγοντα-His κ.λπ.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ της διήθησης γέλης και της χρωματογραφίας συγγένειας;
Η χρωματογραφία είναι μια σημαντική αναλυτική τεχνική. Η χρωματογραφία διήθησης γέλης και η χρωματογραφία συγγένειας είναι δύο σημαντικές παραλλαγές της χρωματογραφίας. Η βασική διαφορά μεταξύ διήθησης γέλης και χρωματογραφίας συγγένειας είναι ότι η χρωματογραφία διήθησης γέλης εξαρτάται από τις διαφορές στο μοριακό βάρος ή το μέγεθος του δείγματος αναλυόμενης ουσίας, ενώ η χρωματογραφία συγγένειας εξαρτάται από τη συγγένεια μιας αναλυόμενης ουσίας με έναν ακινητοποιημένο συνδέτη.
Σύνοψη – Διήθηση γέλης έναντι χρωματογραφίας συγγένειας
Υπάρχουν διαφορετικοί τύποι χρωματογραφικών τεχνικών ανάλογα με την εφαρμογή τους και τη φύση του δείγματος αναλυόμενης ουσίας. Η διήθηση γέλης και η χρωματογραφία συγγένειας είναι δύο τέτοιοι τύποι τεχνικών. Η βασική διαφορά μεταξύ της διήθησης γέλης και της χρωματογραφίας συγγένειας είναι ότι η χρωματογραφία διήθησης γέλης εξαρτάται από τις διαφορές στο μοριακό βάρος ή το μέγεθος του δείγματος αναλυόμενης ουσίας, ενώ η χρωματογραφία συγγένειας εξαρτάται από τη συγγένεια μιας αναλυόμενης ουσίας με έναν ακινητοποιημένο συνδέτη.
