Μετασχηματισμός vs Μεταμόλυνση
Ο μετασχηματισμός και η διαμόλυνση είναι δύο απλές τεχνικές που χρησιμοποιούνται για την εισαγωγή ενός ξένου γονιδίου σε ένα κύτταρο ξενιστή. Ωστόσο, αυτές οι τεχνικές εξαρτώνται από τον τύπο του συστήματος ξενιστή ή φορέα.
Τι είναι ο κυτταρικός μετασχηματισμός;
Ο μετασχηματισμός είναι η τεχνική που χρησιμοποιείται για την εισαγωγή γονιδίων σε ζυμομύκητες και βακτηριακά κύτταρα. Αυτή η τεχνική συνήθως προκαλεί κληρονομήσιμες αλλαγές στα γονίδια και έτσι η έκφραση του γονιδίου είναι μόνιμη. Ο βακτηριακός μετασχηματισμός εισήχθη για πρώτη φορά το 1928 από τον Frederick Griffith. Στη συνέχεια, στις αρχές της δεκαετίας του 1970, αυτή η τεχνική χρησιμοποιήθηκε στην Ε.coli. Κατά τη διάρκεια της διαδικασίας μετασχηματισμού του E. coli, τα κύτταρα εμποτίζονται σε παγωμένο διάλυμα CaCl2 Αυτό το βήμα καθιστά τα κύτταρα E.coli ικανά. Μετά από αυτό, τα ικανά κύτταρα αναμιγνύονται με το πλασμιδικό DNA και επωάζονται σε πάγο για 20-30 λεπτά. Στη συνέχεια δίνεται ένα σύντομο θερμικό σοκ προκειμένου να καταστεί δυνατή η μεταφορά του DNA στο κύτταρο. Τέλος, τα κύτταρα τοποθετούνται σε ζωμό θρεπτικών συστατικών και επωάζονται στους 37 °C για 60-90 λεπτά προκειμένου να δημιουργηθούν τα πλασμίδια. Μόλις ολοκληρωθούν επιτυχώς αυτά τα βήματα, τα μετασχηματισμένα κύτταρα μπορούν να τοποθετηθούν σε κατάλληλο μέσο για τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων. Δεδομένου ότι ο μετασχηματισμός θεωρείται ως αναποτελεσματική τεχνική, δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την προετοιμασία τραπεζών κλώνων.
Τι είναι η κυτταρική επιμόλυνση;
Η μεταμόλυνση είναι μια μέθοδος εισαγωγής ενός ξένου γονιδίου, συνήθως, σε κύτταρα θηλαστικών. Υπάρχουν δύο μέθοδοι επιμόλυνσης. συγκεκριμένα, παροδική επιμόλυνση και σταθερή επιμόλυνση. Σε παροδική επιμόλυνση, η γονιδιακή έκφραση είναι διαθέσιμη για περιορισμένο χρονικό διάστημα. Έτσι, η αλλαγή του γονιδίου προκαλεί προσωρινή έκφραση. Αυτή η μέθοδος επιμόλυνσης είναι απλή και γρήγορη. ως εκ τούτου μπορεί να χρησιμοποιηθεί τακτικά. Ένα μειονέκτημα της παροδικής επιμόλυνσης είναι η δυσκολία εφαρμογής για συστήματα πρωτεϊνοσύνθεσης μεγάλης κλίμακας.
Κατά τη διάρκεια της σταθερής επιμόλυνσης, ένα γονίδιο στόχος ενσωματώνεται στο γονιδίωμα του κυττάρου ξενιστή, και έτσι η γονιδιακή έκφραση είναι μόνιμη, σε αντίθεση με την παροδική επιμόλυνση.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ Μετασχηματισμού και Μεταμόλυνσης;
• Μετασχηματισμός είναι η εισαγωγή ενός γονιδίου σε ένα προκαρυωτικό κύτταρο (βακτηριακό και ζυμομύκητα), ενώ η επιμόλυνση ονομάζεται συνήθως εισαγωγή ενός γονιδίου σε ένα κύτταρο θηλαστικού.
• Ο μετασχηματισμός έχει ως αποτέλεσμα κληρονομική αλλοίωση στα γονίδια, ενώ η μορφομετατροπή μπορεί να οδηγήσει είτε σε προσωρινή έκφραση είτε σε μόνιμες αλλαγές στα γονίδια.
