Η βασική διαφορά μεταξύ Pour plate και Spread plate είναι ότι ένας γνωστός όγκος του δείγματος απλώνεται στην επιφάνεια του μέσου άγαρ σε πλάκα επάλειψης, ενώ, στο pour plate, ένας γνωστός όγκος του δείγματος αναμιγνύεται με άγαρ και μετά χύνεται σε ένα πιάτο. Όταν συγκρίνουμε την ακρίβεια αυτών των δύο τεχνικών, η πλάκα χύτευσης έχει μεγαλύτερη ακρίβεια από την πλάκα απλώματος.
Η τυπική μέθοδος μέτρησης πλακών είναι μια προσέγγιση που βασίζεται στην ανάπτυξη που μετράει τον αριθμό των ζωντανών (αναπτυσσόμενων/καλλιεργήσιμων/βιώσιμων) μικροοργανισμών σε ένα δείγμα. Είναι μια ισχυρή μέθοδος σε χρήση, σε πολλά μικροβιολογικά πεδία για την ανάλυση του αριθμού των ζωντανών μικροοργανισμών. Τα πεδία όπως τα τρόφιμα και τα γαλακτοκομικά, η ιατρική, το περιβάλλον, η υδρόβια και γεωργία, η μικροβιακή γενετική, η μοριακή μικροβιολογία, η ανάπτυξη μέσων ανάπτυξης και η Βιοτεχνολογία (τεχνολογία βιοαντιδραστήρα, ζύμωση, επεξεργασία αποβλήτων/λυμάτων κ.λπ.) χρησιμοποιούν αυτήν την τεχνική. Επιπλέον, υπάρχουν δύο κύριοι τρόποι για να εκτελέσετε μια τυπική μέτρηση πλάκας: αυτοί είναι, η τεχνική Spread plate και η Pour plate technology.
Τι είναι το Pour Plate;
Η τεχνική Pour plate είναι μια μικροβιακή μέθοδος για την απαρίθμηση ορισμένων βιώσιμων κυττάρων που υπάρχουν σε ένα δείγμα. Η ειδικότητα της μεθόδου της πλάκας έκχυσης είναι ότι ένας γνωστός όγκος του δείγματος πρώτα αναμιγνύεται με άγαρ και στη συνέχεια χύνεται στην πλάκα.
Εικόνα 01: Ρίξτε Πλάκα
Άλλα βήματα είναι παρόμοια με την τεχνική της πλάκας απλώματος που συζητείται στην επόμενη ενότητα. Το επόμενο βήμα μετά την έκχυση του άγαρ αναμεμειγμένου με το δείγμα είναι να το αφήσετε να στερεοποιηθεί και να επωαστεί. Μετά την επώαση, η καταμέτρηση του αριθμού των βιώσιμων αποικιών είναι απαραίτητη για τον υπολογισμό της τελικής CFU για 1 g ή 1 ml.
Τι είναι το Spread Plate;
Η πλάκα διασποράς είναι μια τεχνική για την απαρίθμηση βιώσιμων κυττάρων σε ένα δείγμα. Για αυτήν την τεχνική, είναι απαραίτητη μια σειριακή αραίωση για το δείγμα για να διασφαλιστεί ότι τουλάχιστον μία δημιουργεί έναν μετρήσιμο αριθμό αποικιών. Η διαδικασία εδώ είναι να μεταφέρετε με πιπέτα έναν καθορισμένο όγκο αραίωσης στην επιφάνεια μιας πλάκας άγαρ και να τον απλώσετε γρήγορα και ομοιόμορφα στην επιφάνεια του άγαρ με έναν διασκορπιστή γυαλιού, ο οποίος έχει καεί με αλκοόλη και έχει ψυχθεί. Η εκτέλεση των αντιγράφων είναι απαραίτητη για να ληφθεί μια αξιόπιστη μέση τιμή. Το επόμενο βήμα είναι να στεγνώσετε αυτές τις πλάκες για μια σύντομη περίοδο, και στη συνέχεια να τις αναποδογυρίσετε και να τις τοποθετήσετε σε επωαστήρα σε κατάλληλη θερμοκρασία για ανάπτυξη και για καθορισμένη περίοδο επώασης.
Εικόνα 02: Πλάκα απλώματος
Μετά την επώαση, η εξέταση των πλακών θα δείξει την ανάπτυξη. Σε μία ή περισσότερες αραιώσεις, ο αριθμός των κυττάρων που υπάρχουν στα εμβόλια (π.χ. 100 ή 200 μl) θα δημιουργήσει μεταξύ 30 και 300 διακριτές αποικίες στην επιφάνεια του άγαρ. Λιγότερες από 30 μετρήσεις αποικιών είναι στατιστικά αναξιόπιστες. Οι μετρήσεις πάνω από 300 είναι δύσκολο να απαριθμηθούν και είναι επιρρεπείς σε σφάλματα.
Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ της πλάκας χύτευσης και της πλάκας απλώματος;
- Η πλάκα διασποράς και η πλάκα έκχυσης είναι δύο τεχνικές για τη λήψη του αριθμού βιώσιμων κυττάρων που υπάρχουν σε ένα δείγμα.
- Και οι δύο είναι απλές μέθοδοι.
- Σφάλματα δειγματοληψίας μπορεί να συμβούν και στις δύο μεθόδους.
- Οι περιορισμοί των συνθηκών ανάπτυξης επηρεάζουν το αποτέλεσμα και των δύο μεθόδων.
- Τα τεχνικά σφάλματα μπορούν επίσης να επηρεάσουν το τελικό αποτέλεσμα και των δύο μεθόδων.
- Αν και είναι βιώσιμες, οι δύο μέθοδοι δεν χρησιμοποιούνται για την ανάπτυξη μη καλλιεργήσιμων βακτηρίων.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ της πλάκας χύτευσης και της πλάκας απλώματος;
Η πλάκα χύσεως είναι μια μικροβιακή τεχνική για την απαρίθμηση ενός αριθμού βιώσιμων κυττάρων σε ένα δείγμα. Η τεχνική της πλάκας διασποράς είναι μια άλλη τεχνική για την απαρίθμηση των βακτηρίων που αναπτύσσονται στην επιφάνεια του μέσου. Στην τεχνική της πλάκας έκχυσης, η διαδικασία είναι να προστεθεί το δείγμα στην επιφάνεια στερεοποιημένου μέσου στην πλάκα έκχυσης. Αλλά, στην τεχνική της πλάκας spred, η διαδικασία είναι να αναμειγνύεται το δείγμα με το λιωμένο άγαρ και στη συνέχεια να το χύνεται στο πιάτο.
Όσον αφορά την ακρίβεια αυτών των δύο τεχνικών, η πλάκα χύτευσης έχει μεγαλύτερη ακρίβεια από την πλάκα απλώματος. Επιπλέον, σε αντίθεση με μια πλάκα χύτευσης, χρησιμοποιείται ένας διασκορπιστής γυαλιού για να απλώσει το δείγμα ομοιόμορφα στην επιφάνεια σε μια πλάκα απλώματος. Περαιτέρω, χρησιμοποιώντας πλάκα εκχύλισης, είναι δυνατό να απαριθμηθούν τα αερόβια, τα αναερόβια και τα προαιρετικά αναερόβια. Ωστόσο, χρησιμοποιώντας την πλάκα απλώσεως είναι δυνατή μόνο η απαρίθμηση των αεροβίων. Επιπλέον, οι πλάκες στερεοποιημένου άγαρ είναι απαραίτητες για την εκτέλεση της πλάκας επάλειψης, ενώ τα υγρά μέσα λιωμένου άγαρ είναι απαραίτητα για τη μέθοδο έκχυσης.
Σύνοψη – Pour Plate vs Spread Plate
Η πλάκα χύτευσης και η πλάκα επάλειψης είναι δύο τεχνικές στη μικροβιολογία για τη διευκόλυνση της απαρίθμησης των μικροβιακών κυττάρων σε ένα δείγμα. Και οι δύο μέθοδοι βασίζονται στην ανάπτυξη, επομένως, μετρήστε τα βιώσιμα κύτταρα. Κατά τη διάρκεια της πλάκας έκχυσης, ένας γνωστός όγκος του δείγματος αναμιγνύεται με το τηγμένο άγαρ και χύνεται στην πλάκα. Κατά τη διάρκεια της πλάκας απλώματος, ένας γνωστός όγκος απλώνεται στην επιφάνεια του στερεοποιημένου μέσου άγαρ. Αυτή είναι η διαφορά μεταξύ της πλάκας περιχύσεως και της πλάκας απλώματος.
