Η βασική διαφορά μεταξύ της ανάλυσης BCA και της ανάλυσης Bradford είναι ότι η ανάλυση BCA είναι χρονοβόρα και λιγότερο ακριβής, ενώ η ανάλυση Bradford είναι γρήγορη και ακριβής.
Το BCA και η δοκιμασία Bradford είναι δύο μέθοδοι προσδιορισμού προσδιορισμού της συγκέντρωσης πρωτεΐνης. Αυτές οι δύο δοκιμασίες έχουν διαφορετικές αρχές ανάλυσης και διαφορές στην ακρίβειά τους.
Τι είναι η ανάλυση BCA;
Ο προσδιορισμός BCA ή ο προσδιορισμός δικινχονικού οξέος είναι ένας βιοχημικός προσδιορισμός χρήσιμος για τον προσδιορισμό της συνολικής συγκέντρωσης πρωτεΐνης σε ένα διάλυμα. Αυτή η μέθοδος ονομάζεται επίσης ανάλυση Smith από τον εφευρέτη της, Paul K. Smith. Αυτή η αναλυτική μέθοδος δείχνει ομοιότητες με τη δοκιμασία πρωτεΐνης Lowry, τη δοκιμασία πρωτεΐνης Bradford ή το αντιδραστήριο διουρίας. Μπορούμε να παρατηρήσουμε τη συνολική συγκέντρωση πρωτεΐνης σε ένα δεδομένο δείγμα μέσω μιας αλλαγής χρώματος του διαλύματος του δείγματος, η οποία μεταβαίνει από πράσινο σε μοβ. Αυτή η αλλαγή χρώματος συμβαίνει ανάλογα με την περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη. Στη συνέχεια, μπορούμε να χρησιμοποιήσουμε μια χρωματομετρική τεχνική για να αναλύσουμε την ένταση του χρώματος και την περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη στο δείγμα.
BCA Μέθοδος Εκτίμησης Πρωτεϊνών
Όταν εξετάζεται ο μηχανισμός της δοκιμασίας BCA, το τυπικό διάλυμα BCA περιέχει ένα εξαιρετικά αλκαλικό διάλυμα με pH σχεδόν 11,25 και τα συστατικά αυτού του διαλύματος περιλαμβάνουν δικινχονικό οξύ, ανθρακικό νάτριο, διττανθρακικό νάτριο, τρυγικό νάτριο και πενταένυδρος θειικός χαλκός (II). Αυτή η ανάλυση εξαρτάται κυρίως από δύο χημικές αντιδράσεις: την αναγωγή του χαλκού (II) σε χαλκό (Ι) από τους πεπτιδικούς δεσμούς στην πρωτεΐνη και τη χηλίωση δύο μορίων δικινχονικού οξέος με ιόν χαλκού (Ι), με αποτέλεσμα ένα μοβ χρώματος σύμπλοκο που μπορεί να απορροφούν φως σε μήκος κύματος 562 nm. Στην πρώτη αντίδραση, η ποσότητα χαλκού (II) που έχει μειωθεί με πεπτιδικούς δεσμούς είναι ανάλογη με την ποσότητα πρωτεΐνης στο δείγμα.
Τι είναι η ανάλυση Bradford;
Ο προσδιορισμός Bradford είναι μια φασματοσκοπική αναλυτική μέθοδος χρήσιμη για τη μέτρηση της συγκέντρωσης πρωτεΐνης σε ένα διάλυμα. Αυτή η μέθοδος αναπτύχθηκε από την Marion M. Bradford το 1976 και είναι μια σχετικά γρήγορη και ακριβής μέθοδος.
Χρωματική αντίδραση πρωτεΐνης και αντιδραστηρίου Bradford
Μπορούμε να χρησιμοποιήσουμε αυτήν τη μέθοδο για να προσδιορίσουμε τη συγκέντρωση της ποσότητας πρωτεΐνης σε ένα δείγμα. Η χημική αντίδραση που λαμβάνει χώρα στο δείγμα κατά τη διάρκεια αυτής της ανάλυσης εξαρτάται αποκλειστικά από τη σύνθεση αμινοξέων της πρωτεΐνης στο δείγμα.
Μέθοδος Bradford εκτίμησης πρωτεϊνών
Όταν εξετάζουμε τη μέθοδο αυτής της ανάλυσης, πρόκειται για μια χρωματομετρική δοκιμασία πρωτεΐνης που βασίζεται στη μετατόπιση απορρόφησης της χρωστικής που ονομάζεται Coomassie Brilliant Blue G-250. Γενικά, αυτή η βαφή υπάρχει σε τρεις μορφές ως ανιονική (μπλε) μορφή, ουδέτερη (πράσινη) μορφή και κατιονική (κόκκινη). Επομένως, υπό όξινες συνθήκες, η βαφή αλλάζει το χρώμα της από κόκκινο σε μπλε. Αυτό οφείλεται στη δέσμευση της πρωτεΐνης με τη χρωστική ουσία. Αντίθετα, εάν δεν υπάρχει πρωτεΐνη για να συνδεθεί με τη βαφή, η αλλαγή χρώματος δεν εμφανίζεται, το διάλυμα αποκτά κόκκινο-καφέ χρώμα. Αυτή η βαφή είναι ικανή να σχηματίσει ένα ισχυρό, μη ομοιοπολικό σύμπλοκο με την καρβοξυλική ομάδα της πρωτεΐνης μέσω των δυνάμεων Van der Waal και των ηλεκτροστατικών έλξεων.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ BCA και Bradford Assay;
Το BCA και η δοκιμασία Bradford είναι δύο μέθοδοι προσδιορισμού προσδιορισμού της συγκέντρωσης πρωτεΐνης. Αυτές οι δύο δοκιμασίες έχουν διαφορετικές αρχές προσδιορισμού και διαφορές στην ακρίβειά τους. Η βασική διαφορά μεταξύ της ανάλυσης BCA και Bradford είναι ότι η ανάλυση BCA είναι χρονοβόρα και λιγότερο ακριβής, ενώ η ανάλυση Bradford είναι γρήγορη και ακριβής.
Το παρακάτω infographic συνοψίζει τις διαφορές μεταξύ της ανάλυσης BCA και Bradford σε μορφή πίνακα.
Σύνοψη – BCA vs Bradford Assay
Ο προσδιορισμός BCA ή ο προσδιορισμός δικινχονικού οξέος είναι ένας βιοχημικός προσδιορισμός χρήσιμος για τον προσδιορισμό της συνολικής συγκέντρωσης πρωτεΐνης σε ένα διάλυμα. Η δοκιμασία Bradford είναι μια φασματοσκοπική αναλυτική μέθοδος χρήσιμη για τη μέτρηση της συγκέντρωσης πρωτεΐνης σε ένα διάλυμα. Η βασική διαφορά μεταξύ της ανάλυσης BCA και Bradford είναι ότι η BCA είναι χρονοβόρα και λιγότερο ακριβής, ενώ η ανάλυση Bradford είναι γρήγορη και ακριβής.
