Η βασική διαφορά μεταξύ ανοσοκατακρήμνισης και συν-ανοσοκαθίζησης είναι ότι η ανοσοκαθίζηση είναι μια τεχνική που κατακρημνίζει μια πρωτεΐνη από το διάλυμα χρησιμοποιώντας ένα συγκεκριμένο αντίσωμα, ενώ η συνανοσοκαθίζηση είναι μια τεχνική που καθιζάνει άθικτα πρωτεϊνικά σύμπλοκα έξω από το διάλυμα χρησιμοποιώντας ένα συγκεκριμένο αντίσωμα.
Η αλληλεπίδραση αντιγόνου-αντισώματος είναι μια ειδική χημική αλληλεπίδραση μεταξύ αντισωμάτων που παράγονται από Β κύτταρα και αντιγόνων (πρωτεΐνες) κατά τη διάρκεια μιας ανοσολογικής αντίδρασης. Κανονικά, τα διαλυτά αντιγόνα συνδυάζονται με διαλυτά αντισώματα παρουσία ενός ηλεκτρολύτη σε διαλυτή θερμοκρασία και pH προκειμένου να δημιουργηθεί ένα αδιάλυτο ορατό σύμπλοκο. Αυτό ονομάζεται αντίδραση καθίζησης. Επομένως, η ανοσοκατακρήμνιση και η συν-ανοσοκαθίζηση είναι δύο τύποι αντιδράσεων κατακρήμνισης που χρησιμοποιούνται συνήθως στα εργαστήρια για τον εντοπισμό πρωτεϊνών όπως τα αντιγόνα.
Τι είναι η ανοσοκατακρήμνιση;
Η ανοσοκατακρήμνιση είναι μια τεχνική καθίζησης μιας πρωτεΐνης από ένα διάλυμα χρησιμοποιώντας ένα συγκεκριμένο αντίσωμα. Μερικές φορές, αυτή η τεχνική είναι επίσης γνωστή ως ανοσοκαθίζηση μεμονωμένων πρωτεϊνών. Η ανοσοκατακρήμνιση χρησιμοποιεί ένα αντίσωμα για να απομονώσει μια επιλεγμένη πρωτεΐνη ενδιαφέροντος από το κυτταρόλυμα. Το αντίσωμα καθαρίζει την ειδική πρωτεΐνη στόχο ή το αντιγόνο του από ένα μείγμα. Το αντίσωμα δεσμεύεται στην πρωτεΐνη και το σύμπλεγμα αντισώματος-αντιγόνου τραβιέται έξω από το δείγμα. Στην πειραματική διάταξη, το σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος απομακρύνεται χρησιμοποιώντας συζευγμένη πρωτεΐνη A/G αγαρόζη ή μαγνητικά σφαιρίδια. Αργότερα, τα σφαιρίδια πλένονται και η πρωτεΐνη που ενδιαφέρει εκλούεται. Η καθαρισμένη πρωτεΐνη ή αντιγόνο που λαμβάνεται με ανοσοκαταβύθιση επαληθεύεται με μια ποικιλία τεχνικών όπως η ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA) και η κηλίδα western (WB).
Εικόνα 01: Ανοσοκαθίζηση
Επιπλέον, οι απομονωμένες πρωτεΐνες ή αντιγόνα μπορούν να ποσοτικοποιηθούν και να ταυτοποιηθούν μέσω φασματομετρίας μάζας χρησιμοποιώντας ενζυματικά μοτίβα πέψης με βάση την πρωτογενή αλληλουχία. Υπάρχουν ορισμένες σκέψεις πριν από την έναρξη ενός πειράματος ανοσοκατακρήμνισης: επιλογή μορφής μεθόδου, σύνδεση πρωτεϊνών και σφαιριδίων, επιλογή του σωστού πρωτογενούς αντισώματος και ισοτύπου και αρνητικός έλεγχος.
Τι είναι η Συνανοσοκαθίζηση;
Η συνανοσοκαθίζηση είναι μια τεχνική καθίζησης ανέπαφων συμπλεγμάτων πρωτεΐνης έξω από το διάλυμα χρησιμοποιώντας ένα συγκεκριμένο αντίσωμα. Η συνανοσοκαθίζηση γενικά λειτουργεί επιλέγοντας ένα συγκεκριμένο αντίσωμα που στοχεύει μια γνωστή πρωτεΐνη (αντιγόνο) που πιστεύεται ότι είναι μέλος ενός μεγαλύτερου συμπλέγματος πρωτεϊνών. Στοχεύοντας το γνωστό μέλος με ένα συγκεκριμένο αντίσωμα, είναι δυνατό να τραβήξουμε ολόκληρο το πρωτεϊνικό σύμπλεγμα έξω από το διάλυμα. Αυτό επιτρέπει την αναγνώριση των άγνωστων μελών του συμπλέγματος. Η έννοια της εξαγωγής πρωτεϊνικών συμπλεγμάτων από το διάλυμα αναφέρεται μερικές φορές ως μηχανισμός "pull-down".
Εικόνα 02: Β Συνανοσοκαθίζηση
Η συνανοσοκαθίζηση είναι μια ισχυρή τεχνική που χρησιμοποιείται για την ανάλυση των αλληλεπιδράσεων πρωτεΐνης-πρωτεΐνης. Ο κύριος σκοπός της συν-ανοσοκατακρήμνισης είναι η ταυτοποίηση αλληλεπιδρώντων εταίρων όπως συνδέτες, συμπαράγοντες ή μόρια σηματοδότησης προς την πρωτεΐνη ενδιαφέροντος. Επιπλέον, η συνανοσοκαθίζηση είναι μια αποτελεσματική τεχνική που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό πρωτεϊνών από ορό, κυτταρόλυμα, ομογενοποιημένο ιστό ή ρυθμισμένα μέσα.
Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ της ανοσοκατακρήμνισης και της συνανοσοκαθίζησης;
- Η ανοσοκατακρήμνιση και η συν-ανοσοκαθίζηση είναι δύο τύποι τεχνικών που βασίζονται στην αντίδραση κατακρήμνισης.
- Μπορούν να χρησιμοποιηθούν και οι δύο τεχνικές για τον προσδιορισμό του αντιγόνου στόχου μέσω ενός συγκεκριμένου αντισώματος.
- Και οι δύο τεχνικές εξαρτώνται σε μεγάλο βαθμό από την αλληλεπίδραση αντιγόνου-αντισώματος.
- Χρησιμοποιούνται τακτικά σε κλινικά εργαστήρια.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ της ανοσοκατακρήμνισης και της συνανοσοκαθίζησης;
Η ανοσοκατακρήμνιση είναι μια τεχνική που κατακρημνίζει μια πρωτεΐνη έξω από το διάλυμα χρησιμοποιώντας ένα συγκεκριμένο αντίσωμα, ενώ η συνανοσοκαθίζηση είναι μια τεχνική που καθιζάνει άθικτα πρωτεϊνικά σύμπλοκα έξω από το διάλυμα χρησιμοποιώντας ένα συγκεκριμένο αντίσωμα. Έτσι, αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ της ανοσοκατακρήμνισης και της συνανοσοκαθίζησης. Επιπλέον, η ανοσοκατακρήμνιση χρησιμοποιείται πιο συχνά στα εργαστήρια, ενώ η συνανοσοκαθίζηση δεν χρησιμοποιείται συνήθως στα εργαστήρια.
Το παρακάτω infographic παρουσιάζει τις διαφορές μεταξύ της ανοσοκατακρήμνισης και της συνανοσοκαθίζησης σε μορφή πίνακα για σύγκριση δίπλα-δίπλα.
Σύνοψη – Ανοσοκαθίζηση εναντίον Συνανοσοκαθίζησης
Η ανοσοκατακρήμνιση και η συν-ανοσοκαθίζηση είναι δύο τύποι τεχνικών που βασίζονται στην αντίδραση κατακρήμνισης που εξαρτώνται από την αλληλεπίδραση αντιγόνου-αντισώματος. Η τεχνική ανοσοκατακρήμνισης κατακρημνίζει μια πρωτεΐνη έξω από το διάλυμα χρησιμοποιώντας ένα ειδικό αντίσωμα, ενώ η τεχνική της συν-ανοσοκαθίζησης καθιζάνει άθικτα πρωτεϊνικά σύμπλοκα έξω από το διάλυμα χρησιμοποιώντας ένα ειδικό αντίσωμα. Έτσι, αυτό συνοψίζει τη διαφορά μεταξύ της ανοσοκατακρήμνισης και της συνανοσοκαθίζησης.
