Η βασική διαφορά μεταξύ της απομόνωσης DNA και RNA είναι ότι η απομόνωση DNA είναι μια διαδικασία όπου ένας τύπος νουκλεϊκού οξέος που ονομάζεται DNA εξάγεται από ένα βιολογικό κύτταρο, ενώ η απομόνωση RNA είναι μια διαδικασία όπου ένας τύπος νουκλεϊκού οξέος που ονομάζεται RNA είναι εξάγεται από ένα βιολογικό κύτταρο.
Η απομόνωση νουκλεϊκού οξέος είναι το σημείο εκκίνησης σε ένα ευρύ φάσμα εφαρμογών κατάντη. Η υψηλή ποιότητα των νουκλεϊκών οξέων στα αρχικά δείγματα είναι βασικός παράγοντας για την επιτυχία των επακόλουθων κατάντη εφαρμογών. Η απομόνωση νουκλεϊκού οξέος θα μπορούσε να οριστεί ως μια σειρά βημάτων για τη λήψη νουκλεϊκού οξέος σε ένα δείγμα καθαρότητας που μπορεί να χρησιμοποιηθεί για διαφορετικά στάδια εφαρμογής κατάντη. Ο σκοπός της εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος είναι να αποσυντεθεί η κυτταρική μεμβράνη και να επιτευχθεί η μέγιστη απομάκρυνση λιπιδίων και πρωτεϊνών για να ληφθούν καθαρά νουκλεϊκά οξέα όπως το DNA ή το RNA.
Τι είναι η απομόνωση DNA;
Η απομόνωση DNA είναι μια διαδικασία ρουτίνας όπου ένας τύπος νουκλεϊκού οξέος που ονομάζεται DNA εξάγεται από ένα βιολογικό κύτταρο. Η απομόνωση DNA πραγματοποιείται με εξαγωγή DNA από αίμα, κατεψυγμένα δείγματα ιστού και μπλοκ ιστού παραφίνης. Υπάρχουν τρία κύρια στάδια στην απομόνωση του DNA, συμπεριλαμβανομένης της κυτταρικής λύσης, της εκχύλισης του DNA και της καθίζησης. Στη λύση των κυττάρων, τα κύτταρα σε ένα δείγμα διαχωρίζονται το ένα από το άλλο συχνά με φυσικά μέσα όπως άλεση ή στροβιλισμό και τοποθετούνται σε διάλυμα που περιέχει αλάτι. Συνήθως, τα θετικά φορτισμένα ιόντα νατρίου στο αλάτι βοηθούν στην προστασία των αρνητικά φορτισμένων φωσφορικών ομάδων που διατρέχουν τη ραχοκοκαλιά του DNA. Αργότερα, προστίθεται ένα απορρυπαντικό για τη διάσπαση των λιπιδίων στην κυτταρική μεμβράνη και τους πυρήνες, οι οποίοι απελευθερώνουν DNA καθώς αυτές οι μεμβράνες διασπώνται.
Εικόνα 01: Απομόνωση DNA
Εκτελείται εξαγωγή DNA για να ληφθεί ένα καθαρό δείγμα DNA. Συχνά, ένα ένζυμο πρωτεάσης προστίθεται για να αποικοδομήσει πρωτεΐνες που σχετίζονται με το DNA και άλλες κυτταρικές πρωτεΐνες. Επιπλέον, μερικά από τα κυτταρικά υπολείμματα μπορούν να αφαιρεθούν με φιλτράρισμα του δείγματος. Τέλος, το DNA κατακρημνίζεται με τη χρήση αλκοόλης. Επιπλέον, εάν υπάρχει πολύ DNA, μπορεί να παρατηρηθεί ένα τσιμπημένο λευκό ίζημα στο τέλος της διαδικασίας.
Τι είναι η απομόνωση RNA;
Η απομόνωση RNA είναι μια διαδικασία όπου ένας τύπος νουκλεϊκού οξέος που ονομάζεται RNA εξάγεται από ένα βιολογικό κύτταρο. Αυτή η διαδικασία συχνά περιπλέκεται από την παρουσία ενζύμων ριβονουκλεάσης σε κύτταρα και ιστούς που αποικοδομούν το RNA. Στη μοριακή βιολογία χρησιμοποιούνται διάφορες μέθοδοι για την απομόνωση RNA από δείγματα, όπως η εκχύλιση γουανιδινίου-θειοκυανικού-φαινόλης-χλωροφορμίου.
Εικόνα 02: Απομόνωση RNA
Η απομόνωση RNA συνήθως αποτελείται από πολλά στάδια, συμπεριλαμβανομένης της κυτταρικής λύσης και ομογενοποίησης, της απόσβεσης βιοχημικών διεργασιών, της κατανομής νουκλεϊκού οξέος, της ανάκτησης RNA, του ακατέργαστου καθαρισμού και της αξιολόγησης της ποιότητας του RNA. Η μέθοδος λύσης και έκλουσης που βασίζεται σε διηθητικό χαρτί έχει υψηλή ικανότητα απόδοσης στην εκχύλιση RNA. Επιπλέον, η εκχύλιση RNA σε υγρό άζωτο με χρήση γουδί και γουδοχέρι είναι επίσης μια πολύ χρήσιμη μέθοδος καθώς αποτρέπει τη δραστηριότητα της ριβονουκλεάσης.
Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ της απομόνωσης DNA και RNA;
- Η απομόνωση DNA και RNA είναι δύο τύποι διαδικασιών απομόνωσης νουκλεϊκού οξέος.
- Και οι δύο διαδικασίες έχουν παρόμοια βασικά βήματα, όπως λύση, εκχύλιση και καθαρισμό κυττάρων.
- Αυτές οι διαδικασίες απομονώνουν σημαντικούς τύπους νουκλεϊκών οξέων που έχουν έναν αριθμό κατάντη εφαρμογών.
- Εκτελούνται σε εργαστηριακές ρυθμίσεις.
- Μπορούν να εκτελεστούν χρησιμοποιώντας κατασκευασμένα κιτ.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ της απομόνωσης DNA και RNA;
Στην απομόνωση DNA, ένας τύπος νουκλεϊκού οξέος που ονομάζεται DNA εξάγεται από ένα βιολογικό κύτταρο, ενώ στην απομόνωση RNA, ένας τύπος νουκλεϊκού οξέος που ονομάζεται RNA εξάγεται από ένα βιολογικό κύτταρο. Έτσι, αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ της απομόνωσης DNA και RNA. Επιπλέον, η απομόνωση DNA πραγματοποιείται κανονικά σε pH περίπου 7 έως 8, ενώ η απομόνωση RNA πραγματοποιείται συνήθως σε pH περίπου 4,5.
Το παρακάτω infographic παρουσιάζει τις διαφορές μεταξύ της απομόνωσης DNA και RNA σε μορφή πίνακα για σύγκριση δίπλα-δίπλα.
Σύνοψη – Απομόνωση DNA έναντι RNA
Η απομόνωση DNA και RNA είναι δύο τύποι διαδικασιών απομόνωσης νουκλεϊκού οξέος. Η απομόνωση DNA είναι μια διαδικασία κατά την οποία το DNA εξάγεται από ένα βιολογικό κύτταρο. Η απομόνωση RNA είναι μια διαδικασία κατά την οποία το RNA εξάγεται από ένα βιολογικό κύτταρο. Έτσι, αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ της απομόνωσης DNA και RNA.
