Η βασική διαφορά μεταξύ ζυμομύκητα ένα υβρίδιο και υβρίδιο ζυμομύκητα δύο είναι ότι το υβρίδιο ζυμομύκητα ένα είναι μια δοκιμασία που βασίζεται in vitro για την ανάλυση αλληλεπιδράσεων DNA-πρωτεΐνης, ενώ το υβρίδιο ζυμομύκητα δύο είναι μια δοκιμασία που βασίζεται in vitro για την ανάλυση των αλληλεπιδράσεων πρωτεΐνης-πρωτεΐνης.
Η μελέτη των αλληλεπιδράσεων μεταξύ των κυτταρικών μορίων μπορεί να βοηθήσει στον καθορισμό των θέσεων αναγνώρισης που εμπλέκονται στη γονιδιακή έκφραση και στις πρωτεϊνικές οδούς. Οι αλληλεπιδράσεις DNA και πρωτεϊνών αποτελούν αναπόσπαστο κομμάτι των κυτταρικών διεργασιών, όπως τροποποιήσεις DNA και μεταγραφική ρύθμιση, κ.λπ. Από την άλλη πλευρά, οι αλληλεπιδράσεις πρωτεϊνών και πρωτεϊνών παίζουν ζωτικούς ρόλους σε κυτταρικές διαδικασίες όπως η αντιγραφή, η μεταγραφή, η μετάφραση και η μεταγωγή σήματος. Ως εκ τούτου, είναι εξαιρετικά σημαντικό να εντοπιστούν αυτές οι αλληλεπιδράσεις των κυτταρικών μορίων μέσω διαφορετικών αναλύσεων. Το υβρίδιο ζυμομύκητα ένα υβρίδιο και το υβρίδιο ζυμομύκητα δύο είναι δύο in vitro αναλύσεις για την ανάλυση των αλληλεπιδράσεων DNA-πρωτεΐνης και πρωτεΐνης-πρωτεΐνης.
Τι είναι το Yeast One Hybrid;
Το Yaast one hybrid (Y1H) είναι μια in vitro ανάλυση που βασίζεται στην ανάλυση των ενδοκυτταρικών αλληλεπιδράσεων DNA-πρωτεΐνης. Αυτή η μέθοδος καθιερώθηκε για πρώτη φορά από τους Wang και Reed το 1993. Από τότε, έχει δείξει μεγαλύτερη δύναμη στη βιολογική έρευνα. Σε αυτή τη δοκιμασία, υπάρχουν δύο κύρια συστατικά: δόλωμα DNA και πρωτεϊνικά θηράματα.
Εικόνα 01: Yeast One Hybrid
Στη διαδικασία, μια αλληλουχία DNA (δόλωμα DNA) κλωνοποιείται πρώτα ανάντη δύο διαφορετικών ανταποκριτών (HIS3, LacZ). Αυτά τα κατασκευάσματα αναφοράς ενσωματώνονται στο γονιδίωμα ενός στελέχους ζυμομύκητα. Οι μεταγραφικοί παράγοντες λαμβάνονται ως θηράματα πρωτεΐνης. Οι μεταγραφικοί παράγοντες συγχωνεύονται με τον τομέα μεταγραφικής ενεργοποίησης (AD) του μεταγραφικού παράγοντα Gal4 ζυμομύκητα προκειμένου να παραχθούν υβριδικές πρωτεΐνες. Ολόκληρη αυτή η υβριδική πρωτεΐνη ενσωματώνεται σε ένα πλασμίδιο πριν την εισαγάγει στο στέλεχος ζυμομύκητα. Μετά την εισαγωγή του ανασυνδυασμένου πλασμιδίου, όταν ο μεταγραφικός παράγοντας αλληλεπιδρά με το θραύσμα DNA, το τμήμα AD ενεργοποιεί την έκφραση του γονιδίου αναφοράς (HIS3 ή LacZ). Ο προσδιορισμός της αλληλουχίας των πλασμιδίων επιτρέπει την ταυτοποίηση του μεταγραφικού παράγοντα που μπορεί να συνδεθεί με το θραύσμα DNA. Πρόσφατα, χρησιμοποιήθηκε υβριδική μέθοδος μαγιάς για την έρευνα διάγνωσης ασθενειών. Επομένως, στο μέλλον, αυτή η ανάλυση θα χρησιμοποιείται ευρύτερα στην επιστημονική έρευνα και τις ιατρικές θεραπείες.
Τι είναι το Yeast Two Hybrid;
Το Yaast two hybrid (Y2H) είναι μια in vitro ανάλυση για την ανάλυση των ενδοκυτταρικών αλληλεπιδράσεων πρωτεϊνών και πρωτεϊνών. Αυτή η μέθοδος βρέθηκε αρχικά από τους Stanley Fields και Ok-Kyu Song το 1989. Αυτή η τεχνική ανιχνεύει αλληλεπιδράσεις πρωτεΐνης-πρωτεΐνης χρησιμοποιώντας τον παράγοντα μεταγραφής Gal4 της ζύμης.
Εικόνα 02: Υβρίδιο δύο μαγιάς
Σε αυτή τη μέθοδο, δύο συντήξεις (υβρίδια) κατασκευάζονται αρχικά χρησιμοποιώντας πρωτεΐνες ενδιαφέροντος: σύντηξη μιας πρωτεΐνης με περιοχή σύνδεσης DNA (DBD) και σύντηξη της άλλης πρωτεΐνης με την περιοχή ενεργοποιητή (AD) του παράγοντα μεταγραφής Gal4. Η πρωτεΐνη συντηγμένη με DBD είναι γνωστή ως δόλωμα, ενώ η πρωτεΐνη που συγχωνεύεται με AD είναι γνωστή ως θήραμα. Στο στέλεχος ζυμομύκητα, κατά την αλληλεπίδραση του δολώματος και του θηράματος, τα DBD και AD έρχονται σε κοντινή απόσταση για να δημιουργήσουν έναν λειτουργικό παράγοντα μεταγραφής Gal4 ανάντη του γονιδίου αναφοράς. Ο λειτουργικός παράγοντας μεταγραφής ενεργοποιεί την έκφραση του γονιδίου αναφοράς. Επιπλέον, αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται επί του παρόντος για τον έλεγχο των αλληλεπιδράσεων των ενσωματωμένων μεμβρανικών πρωτεϊνών σε κύτταρα θηλαστικών.
Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ του Yeast One Hybrid και του Yeast Two Hybrid;
- Yaast one hybrid and yeast two hybrid είναι δύο in vitro αναλύσεις για την ανάλυση των αλληλεπιδράσεων DNA-πρωτεΐνης και πρωτεΐνης-πρωτεΐνης.
- Αυτές οι δοκιμές χρησιμοποιούν στελέχη ζύμης.
- Και οι δύο δοκιμασίες χρησιμοποιούν τον τομέα ενεργοποίησης (AD) του παράγοντα μεταγραφής Gal4.
- Χρησιμοποιούν έκφραση γονιδίου αναφοράς (HIS3 ή LacZ) για να ανιχνεύσουν αλληλεπιδράσεις.
- Έχουν δόλωμα και θήραμα.
- Και οι δύο δοκιμές είναι ιδιαίτερα χρήσιμες στη σύγχρονη βιολογική έρευνα.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ Yeast One Hybrid και Yeast Two Hybrid;
Το υβρίδιο ζυμομύκητα ένα είναι μια in vitro ανάλυση για την ανάλυση αλληλεπιδράσεων DNA και πρωτεϊνών, ενώ το υβρίδιο ζυμομύκητα δύο είναι μια δοκιμασία που βασίζεται in vitro για την ανάλυση αλληλεπιδράσεων πρωτεϊνών και πρωτεϊνών. Έτσι, αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ μαγιάς ένα υβρίδιο και μαγιάς δύο υβριδίου. Επιπλέον, σε ένα υβρίδιο ζυμομύκητα, το δόλωμα είναι ένα θραύσμα DNA και το θήραμα είναι ένα μόριο πρωτεΐνης. Από την άλλη πλευρά, στα δύο υβρίδια ζύμης, τόσο το δόλωμα όσο και το θήραμα είναι μόρια πρωτεΐνης.
Το παρακάτω infographic παραθέτει τις διαφορές μεταξύ μαγιάς ένα υβρίδιο και μαγιάς δύο υβριδίου σε μορφή πίνακα για σύγκριση δίπλα-δίπλα.
Σύνοψη – Yeast One Hybrid vs Yeast Two Hybrid
Yaast one hybrid και yeast two hybrid είναι δύο σημαντικές in vitro αναλύσεις που βασίζονται σε. Το υβρίδιο ζυμομύκητα ένα είναι μια δοκιμασία που βασίζεται in vitro για την ανάλυση αλληλεπιδράσεων DNA και πρωτεϊνών, ενώ το υβρίδιο ζυμομύκητα δύο είναι μια δοκιμασία που βασίζεται in vitro για την ανάλυση αλληλεπιδράσεων πρωτεΐνης και πρωτεΐνης. Έτσι, αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ μαγιάς ένα υβρίδιο και μαγιάς δύο υβριδίου.
