Βασική διαφορά – Ηλεκτροφόρηση gel vs Σελίδα SDS
Η ηλεκτροφόρηση γέλης είναι μια τεχνική που διαχωρίζει τα μακρομόρια σε ένα ηλεκτρικό πεδίο. Είναι μια κοινή μέθοδος στη Μοριακή βιολογία ο διαχωρισμός του DNA, του RNA και των πρωτεϊνών από μείγματα ανάλογα με το μοριακό τους μέγεθος. Το SDS Page είναι ένας τύπος ηλεκτροφόρησης γέλης που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό πρωτεϊνών από ένα μείγμα πρωτεϊνών με βάση τα μεγέθη τους. Η ηλεκτροφόρηση γέλης είναι ένας όρος που χρησιμοποιείται για να αναφέρεται στην κανονική τεχνική που εφαρμόζεται για τον διαχωρισμό DNA, RNA και πρωτεϊνών, ενώ η σελίδα SDS είναι ένας τύπος ηλεκτροφόρησης γέλης. Αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ της ηλεκτροφόρησης γέλης και της Σελίδας SDS.
Τι είναι η ηλεκτροφόρηση γέλης;
Η ηλεκτροφόρηση γέλης είναι μια κοινή τεχνική που χρησιμοποιείται στα εργαστήρια για τον διαχωρισμό φορτισμένων μορίων όπως DNA, RNA, πρωτεΐνες κ.λπ. από τα μείγματά τους. Ένα gel χρησιμοποιείται στην ηλεκτροφόρηση γέλης. Λειτουργεί ως μοριακό κόσκινο. Υπάρχουν δύο τύποι πηκτωμάτων που χρησιμοποιούνται στην ηλεκτροφόρηση γέλης, δηλαδή η αγαρόζη και το πολυακρυλαμίδιο. Η επιλογή ενός παρασκευάσματος γέλης και γέλης είναι σημαντικοί παράγοντες που πρέπει να λαμβάνονται υπόψη στις ηλεκτροφόρες γέλης, καθώς το μέγεθος των πόρων της γέλης θα πρέπει να ελέγχεται προσεκτικά για καλό διαχωρισμό των μορίων μέσω ηλεκτροφόρησης γέλης. Η ηλεκτροφόρηση γέλης έχει ένα ηλεκτρικό πεδίο συνδεδεμένο με δύο άκρα της γέλης. Το ένα άκρο του τζελ δείχνει θετικό φορτίο ενώ το άλλο άκρο είναι αρνητικά φορτισμένο.
Το DNA και το RNA είναι αρνητικά φορτισμένα μόρια. Μόλις φορτωθούν στη γέλη από το αρνητικό άκρο της γέλης και εφαρμοστούν στο ηλεκτρικό πεδίο, μεταναστεύουν μέσω των πόρων της γέλης προς το θετικά φορτισμένο άκρο της γέλης. Η ταχύτητα της μετανάστευσης εξαρτάται από το φορτίο και το μέγεθος του μορίου. Τα μικρότερα μόρια μεταναστεύουν εύκολα μέσω των πόρων της γέλης από τα μεγαλύτερα μόρια. Ως εκ τούτου, τα μικρότερα μόρια ταξιδεύουν σε μεγάλη απόσταση μέσω της γέλης και τα μεγαλύτερα μόρια ταξιδεύουν σε μικρή απόσταση. Για την παρατήρηση της κίνησης των μορίων στο πήκτωμα, χρησιμοποιούνται ειδικοί τύποι χρωστικών. Το ηλεκτρικό πεδίο εφαρμόζεται για μια ορισμένη χρονική περίοδο και σταματά για να αποτραπεί η απώλεια μορίων και να διατηρηθούν τα μόρια στις θέσεις που ταξιδεύουν. Διαφορετικές ζώνες μπορούν να παρατηρηθούν στο πήκτωμα. Αυτές οι ζώνες αντιπροσωπεύουν τα μόρια διαφορετικών μεγεθών. Ως εκ τούτου, η ηλεκτροφόρηση γέλης είναι χρήσιμη για τη διαφοροποίηση των μορίων ανάλογα με το μέγεθός τους.
Η ηλεκτροφόρηση γέλης ενσωματώνεται σε διάφορες τεχνικές ως προπαρασκευαστική τεχνική στη Μοριακή Βιολογία όπως PCR, RFLP, κλωνοποίηση, προσδιορισμός αλληλουχίας DNA, στύπωμα Southern, χαρτογράφηση γονιδιώματος κ.λπ.
Εικόνα 01: Ηλεκτροφόρηση γέλης αγαρόζης
Τι είναι η Σελίδα SDS;
Η ηλεκτροφόρηση γέλης πολυακρυλαμιδίου δωδεκυλοθειικού νατρίου (SDS Page) είναι ένας τύπος ηλεκτροφόρησης γέλης που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό πρωτεϊνών. Όταν χρησιμοποιείται ηλεκτροφόρηση γέλης για τον διαχωρισμό πρωτεϊνών, απαιτούνται ειδικές θεραπείες, καθώς οι πρωτεΐνες δεν είναι αρνητικά φορτισμένες όπως το DNA και το RNA και δεν μεταναστεύουν προς το θετικό ή το αρνητικό άκρο. Ως εκ τούτου, οι πρωτεΐνες μετουσιώνονται και επικαλύπτονται με αρνητικό φορτίο πριν από την ηλεκτροφόρηση γέλης. Γίνεται χρησιμοποιώντας ένα απορρυπαντικό που ονομάζεται δωδεκυλοθειικό νάτριο (SDS). Η ηλεκτροφόρηση γέλης που χρησιμοποιεί SDS και γέλη πολυακρυλαμιδίου για το μέσο στήριξης είναι γνωστή ως Σελίδα SDS. Αυτή η τεχνική χρησιμοποιείται συνήθως στη βιοχημεία, τη γενετική, την εγκληματολογία και τη μοριακή βιολογία.
Κατά τη Σελίδα SDS, οι πρωτεΐνες αναμειγνύονται με SDS. Το SDS ξεδιπλώνει τις πρωτεΐνες σε γραμμικό σχήμα και τις επικαλύπτει με αρνητικό φορτίο ανάλογο της μοριακής τους μάζας. Λόγω του αρνητικού φορτίου, τα μόρια πρωτεΐνης μεταναστεύουν προς το άκρο θετικού φορτίου της γέλης και διαχωρίζονται ανάλογα με τις μοριακές τους μάζες. Στη σελίδα SDS, το πολυακρυλαμίδιο χρησιμοποιείται ως στερεό στήριγμα για το πήκτωμα. Ο πραγματικός διαχωρισμός των πρωτεϊνών εξαρτάται κυρίως από τις ιδιότητες της γέλης. Ως εκ τούτου, η προετοιμασία γέλης πολυακρυλαμιδίου θα πρέπει να γίνεται προσεκτικά και θα πρέπει να χρησιμοποιούνται σωστές συγκεντρώσεις πολυακρυλαμιδίου. Τα πηκτώματα πολυακρυλαμιδίου παρουσιάζουν υψηλή ανάλυση από τα πηκτώματα αγαρόζης. Ως εκ τούτου, η Σελίδα SDS θεωρείται μια τεχνική υψηλής ανάλυσης για τον διαχωρισμό πρωτεϊνών.
Η σελίδα SDS είναι ένας τύπος ηλεκτροφόρησης μετουσιωτικής γέλης. Έχει σημαντικό περιορισμό στην ανάλυση πρωτεϊνών. Εφόσον το SDS μετουσιώνει τις πρωτεΐνες πριν από τον διαχωρισμό, δεν επιτρέπει την ανίχνευση ενζυματικής δραστηριότητας, αλληλεπιδράσεις δέσμευσης πρωτεϊνών, συμπαράγοντες πρωτεΐνης κ.λπ.
Εικόνα 02: Σελίδα SDS
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ της ηλεκτροφόρησης gel και της σελίδας SDS;
Ηλεκτροφόρηση gel vs Σελίδα SDS |
|
| Η ηλεκτροφόρηση γέλης είναι μια μέθοδος που εκτελείται για τον διαχωρισμό μακρομορίων χρησιμοποιώντας ηλεκτρικό πεδίο. | Η σελίδα SDS Page είναι μια τεχνική ηλεκτροφόρησης γέλης υψηλής ανάλυσης που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό πρωτεϊνών με βάση τη μάζα τους. |
| Gel Run | |
| Μπορεί να εκτελεστεί με οριζόντιο ή κατακόρυφο τρόπο. | Η σελίδα SDS εκτελείται πάντα κάθετα. |
| Βάση χωρισμού | |
| Ο διαχωρισμός γίνεται ανάλογα με τη χρέωση και το μέγεθος. | Ο διαχωρισμός της πρωτεΐνης γίνεται ανάλογα με τη μάζα και το φορτίο. |
| Ανάλυση | |
| Η ηλεκτροφόρηση γέλης αγαρόζης έχει χαμηλή ανάλυση και η ηλεκτροφόρηση γέλης πολυακρυλαμιδίου έχει υψηλότερη ανάλυση | Η σελίδα SDS έχει καλύτερη ανάλυση. |
| Μετουσίωση | |
| Η ηλεκτροφόρηση γέλης περιλαμβάνει τόσο μετουσιωτικές όσο και μη μετουσιωτικές τεχνικές. | Η σελίδα SDS μετουσιώνει τις πρωτεΐνες πριν από τον διαχωρισμό. |
Σύνοψη – Ηλεκτροφόρηση gel vs Σελίδα SDS
Η ηλεκτροφόρηση γέλης είναι μια κοινή τεχνική που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό και την ανάλυση DNA, RNA και πρωτεϊνών με βάση το μέγεθος και το φορτίο τους. Υπάρχουν δύο κύριοι τύποι ηλεκτροφόρησης γέλης, δηλαδή η ηλεκτροφόρηση γέλης αγαρόζης και η ηλεκτροφόρηση γέλης πολυακρυλαμιδίου. Τα πηκτώματα αγαρόζης χρησιμοποιούνται κυρίως για διαχωρισμό νουκλεϊκών οξέων. όταν απαιτείται υψηλότερη ανάλυση, χρησιμοποιούνται πηκτώματα πολυακρυλαμιδίου. Το SDS Page είναι ένας τύπος ηλεκτροφόρησης γέλης που χρησιμοποιείται συνήθως για τον διαχωρισμό πολύπλοκων μιγμάτων πρωτεϊνών. Θεωρείται ως τεχνική διαχωρισμού πρωτεϊνών υψηλής ανάλυσης. Αυτή είναι η διαφορά μεταξύ ηλεκτροφόρησης γέλης και Σελίδα SDS.
