Η βασική διαφορά μεταξύ του pBR322 και του pUC19 είναι ότι το pBR322 είναι ένας πλασμιδιακός φορέας με μήκος 4361 ζεύγη βάσεων, ενώ ο pUC19 είναι ένας πλασμιδιακός φορέας με μήκος 2686 ζεύγη βάσεων.
Ένας φορέας κλωνοποίησης είναι ένα μικρό κομμάτι DNA που μπορεί να διατηρηθεί σταθερά σε έναν οργανισμό. Είναι επίσης ένα μικρό κομμάτι DNA στο οποίο μπορεί να εισαχθεί ένα ξένο θραύσμα DNA για σκοπούς κλωνοποίησης. Ένας φορέας περιέχει σημαντικά χαρακτηριστικά που επιτρέπουν την εύκολη εισαγωγή ενός ξένου θραύσματος DNA σε φορείς, όπως θέσεις περιορισμού, έναν επιλέξιμο δείκτη, γονίδιο αναφοράς και στοιχείο έκφρασης. Η κλωνοποίηση πραγματοποιήθηκε για πρώτη φορά χρησιμοποιώντας Ε.coli. Οι φορείς κλωνοποίησης για το Ε. coli περιλαμβάνουν πλασμίδια, βακτηριοφάγους, κοσμίδια και βακτηριακά τεχνητά χρωμοσώματα (BAC). Οι πιο συχνά χρησιμοποιούμενοι φορείς είναι τα γενετικά τροποποιημένα πλασμίδια. Το pBR322 και το pUC19 είναι δύο τύποι πλασμιδιακών φορέων.
Τι είναι το pBR322;
Το pBR322 είναι ένας πλασμιδικός φορέας. Είναι ένας από τους πρώτους ευρέως χρησιμοποιούμενους φορείς κλωνοποίησης για E. coli. Αυτός ο φορέας δημιουργήθηκε για πρώτη φορά το 1977 στο εργαστήριο του Herbert Boyer στο Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνια στο Σαν Φρανσίσκο. Είναι ένα κυκλικό δίκλωνο DNA που έχει μήκος 4361 ζεύγη βάσεων.
Εικόνα 01: pBR322
Αυτός ο πλασμιδιακός φορέας έχει ειδικά χαρακτηριστικά. Κανονικά, έχει δύο γονίδια ανθεκτικότητας στα αντιβιοτικά: το γονίδιο bla που κωδικοποιεί την πρωτεΐνη αντίστασης στην αμπικιλλίνη (AmpR) και το γονίδιο tetA που κωδικοποιεί την αντίσταση στην τετρακυκλίνη (TetR) πρωτεΐνη. Επιπλέον, περιέχει την αρχή της αντιγραφής του pMB1. Αυτός ο φορέας πλασμιδίου έχει επίσης γονίδιο rop που κωδικοποιεί έναν περιοριστή του αριθμού αντιγράφου του πλασμιδίου. Επιπλέον, αυτός ο φορέας έχει μοναδικές θέσεις περιορισμού για περισσότερα από 40 ένζυμα περιορισμού. Έντεκα από αυτές τις σαράντα θέσεις περιορισμού βρίσκονται εντός του γονιδίου TetR . Υπάρχουν δύο θέσεις περιορισμού για τα περιοριστικά ένζυμα HindIII και ClaI εντός του προαγωγέα του γονιδίου TetR . Επιπλέον, υπάρχουν έξι πολύ σημαντικές θέσεις περιορισμού στο γονίδιο AmpR. Το pBR322 είναι ένας φορέας κλωνοποίησης χαμηλού αριθμού αντιγράφων. Παρέχει περίπου 20 αντίγραφα πλασμιδίου ανά βακτηριακό κύτταρο. Το μοριακό βάρος του φορέα είναι 2,83×106 d altons.
Τι είναι το pUC19;
Το pUC19 είναι ένας φορέας πλασμιδίου που έχει μήκος 2686 ζεύγη βάσεων. Είναι ένας από τη σειρά πλασμιδιακών φορέων που δημιουργήθηκαν από τον Joachim Messing και τους συνεργάτες του. Η πρώιμη εργασία σε αυτή τη σειρά πλασμιδίων διεξήχθη στο Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνια. Είναι ένα κυκλικό δίκλωνο DNA.
Εικόνα 02: pUC19
Αυτός ο φορέας πλασμιδίου περιέχει επίσης σημαντικά χαρακτηριστικά. Έχει ένα Ν τερματικό θραύσμα του γονιδίου β γλακτοσιδάσης (lacz). Διαθέτει επίσης περιοχή πολλαπλής κλωνοποίησης (MCS). Αυτή η περιοχή χωρίζεται στα κωδικόνια 6 και 7 του γονιδίου lacz. Η περιοχή MCS παρέχει πολλές θέσεις περιορισμού ενδονουκλεασών περιορισμού. Εκτός από το γονίδιο β γλακτοσιδάσης, το pUC19 κωδικοποιεί επίσης ένα γονίδιο αντίστασης στην αμπικιλλίνη (AmpR). Επιπλέον, η αρχή της αντιγραφής προέρχεται από το πλασμίδιο pMB1. Αν και το pUC19 είναι μικρό σε μέγεθος, έχει υψηλό αριθμό αντιγράφων (500-700 αντίγραφα ανά βακτηριακό κύτταρο). Το μοριακό βάρος αυτού του πλασμιδικού φορέα είναι 1,75×106 d altons.
Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ του pBR322 και του pUC19;
- pBR322 και pUC19 είναι δύο τύποι πλασμιδικών φορέων.
- Είναι δημοφιλείς φορείς κλωνοποίησης για coli.
- Και οι δύο πλασμιδικοί φορείς έχουν την ίδια μορφή αρχής αντιγραφής του πλασμιδίου pMB1.
- Αυτά τα διανύσματα έχουν πολλαπλές τοποθεσίες περιορισμού.
- Και οι δύο πλασμιδικοί φορείς έχουν ένα γονίδιο αντίστασης στην αμπικιλλίνη ως επιλέξιμο δείκτη.
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ του pBR322 και του pUC19;
Το pBR322 είναι ένας πλασμιδιακός φορέας που έχει μήκος 4361 ζεύγη βάσεων, ενώ ο pUC19 είναι ένας πλασμιδιακός φορέας μήκους 2686 ζευγών βάσεων. Έτσι, αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ του pBR322 και του pUC19. Επιπλέον, το pBR322 είναι ένας πλασμιδιακός φορέας χαμηλού αριθμού αντιγράφων, ενώ ο pUC19 είναι ένας πλασμιδιακός φορέας υψηλού αριθμού αντιγράφων.
Το παρακάτω infographic παρουσιάζει τις διαφορές μεταξύ του pBR322 και του pUC19 σε μορφή πίνακα για σύγκριση δίπλα-δίπλα.
Σύνοψη – pBR322 vs pUC19
Οι πιο συχνά χρησιμοποιούμενοι φορείς κλωνοποίησης για το E.coli είναι πλασμίδια γενετικά τροποποιημένα. Τα pBR322 και pUC19 είναι δύο τύποι πλασμιδιακών φορέων. Το pBR322 είναι ένας πλασμιδιακός φορέας που έχει μήκος 4361 ζεύγη βάσεων, ενώ ο pUC19 είναι ένας πλασμιδιακός φορέας μήκους 2686 ζευγών βάσεων. Έτσι, αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ του pBR322 και του pUC19.
